鸭肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗原、抗体方法的建立.pdfVIP

华中农业大学2007届硕士论文 中文摘要 virus 鸭病毒性肝炎(Duck 性、高度致死性的烈性传染病，病原为鸭肝炎病毒(Duckhepatitisvirus，DrIV)。该 病在国内雏鸭群中频频发生，给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病 鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒，并建立了检测鸭肝炎病毒抗原和血清抗体的 ELISA快速检测方法，取得了如下结果； 1．鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定及部分理化特性的研究 对湖北省内某疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集，通过细菌分离、病毒分离、 中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒的电镜观察，分离到一株鸭病毒 性肝炎I型病毒株，对分离毒株的部分生物学特性进行了初步研究。 2．鸭病毒性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立和初步应用 将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后，作为包被抗原，建立了一种检测血清中 通过对40份阴性鸭血清的检测结果，确定阴阳性临界点为0．2。根据建立的EuSA 方法及最佳反应条件，检测了一批雏鸭携带母源抗体及其消长情况以及一批免疫雏 鸭的抗体消长情况。结果表明，本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝 炎病毒抗体水平的检测以及未免疫鸭群鸭病毒性肝炎感染情况的检测。 3．鸭病毒性肝炎病毒双抗体夹心ELISA快速检测方法的建立和初步应用 以纯化的鸭抗DHVIgG为包被抗体，兔抗DHVIgG为第二抗体，通过ELISA 反应条件的优化选择，建立了检测DHV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸭抗 DHV IgG的最适工作浓度约为 IsG的最佳包被浓度为约299／ml，兔抗DHV 3．4≠,g／ml；与已知鸭病毒性肝炎标准病毒呈强阳性反应，与已知的阴性样品及其它 方法对97份疑为鸭肝炎的病料进行了检测，结果有73份呈阳性。经过比较测定， 夹心ELISA法要比琼脂免疫扩散方法要敏感“倍，说明本方法在检测鸭病毒性肝 炎病毒抗原方面具有特异性强、敏感性高的特点。 关键词：鸭病毒性肝炎。鸭肝炎病毒，分离鉴定，酶联免疫吸附试验，抗原，抗体 鸭肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗原抗体方法的建立 ABSTRACT ofduckviral acute Duck thecausative virus(DHV)isagent hepatitis，ail hepatitis andfataldiseaseof isolateswasobtained dudc youngducklings．Virus throughembryo sac from liver fromHuBei inchina．All allantoicinoculation ducklingsamples provinces these were fromduckvirus ducklingsdiagnosedclinicallydying hepatitis．andthen, ofELISAfor DHV and someresultsas antibody．and antigent gain development detecting follow． inoculationfrom