荔枝种内原生质体电融合参数研究.pdfVIP

热带作物学报 2012，33(6)：1030—1033 ChineseJournalofTropicalCrops 荔枝种内原生质体电融合参数研究 马新业 ，曾继吾z．易干军 z 1广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心．广东广州 510006 2广东省农业科学院果树研究所．广东广州 510640 摘 要 选择 “桂味”和 “妃子笑 ”两个荔枝 (Litchichi—nss／Sonn．)品种 的花药胚性细胞悬浮系来源 的原生质 体作融合亲本 ，在优化电融合参数(排列 电压 5V，脉冲电压 8OV，脉冲持续时间45 5 s，原生质体密度5．0x10s 7．5x105个／mL，融合液 Ca2~浓度 0．2mmol／L，甘露醇浓度 10％～11％)条件下 ，可获得 20％以上双元异核融合率 。 在亲本原生质体混合前，以0．02％中性红 10min染色 “桂味”原生质体 ，有助于双元异核融合体的有效确认 。 关键词 荔枝 ：原生质体融合 ：中性红 中图分类号 $667．1 文献标识码 A Optimization oftheParameterson ProtoplastElectrofusion ofLychee MA Xinye，ZENGJiwu，YIGanjun 1ResearchCenterofChineseHerbdResourceScienceandEngineering,Gunagzhou Universityof TraditionalChineseMedicine，Gunagzhou,Gunagdong510006,China 2InstituteofFruitTreeReserach，CuaagdongAcademyofAgriculturalSciences，Gunagzhou,Cuangdong510640,China Abstract Theprotoplastsoflyehee itchichinensisSonn．)ev．Guiweiandev．Feizixiaoisolatedrespectivelyfrom cellsuspension culturesfrom anther-derived calliwere used forthe fusion．Above 20％ binuclearheterokaryons frequency was achieved under following conditions：altemate currentfield strength of5V，directcurrentpulse suen~h of80V，pulse duration of45~65 s，protoplastdensity at5．0x105~7．5x10 permL，0．2mmol／L Ca and 10％-11％ mannitolin electricalfusion solution．Binuclearhetemkaryonsrfequency could be easily determined by detaining patentprotoplastof lychee ev．Guiweiwith 0．02％ neturalred ofr 10rain before fusing．The results couldbea referenceofrlarge-scaleelectrofusing and subsequenthybrid screening oflitchiprotoplast． Keywords Lychee(LitchichinensisSonn．)；Neturalred；Protoplastelectrofusion doi 10．3969~．issn．1000-2561．2012．06．012 我 国是荔枝 (LitchichinensisSonn．)原产地之 1 材料与方法 一 ． 荔枝种质资源丰富．但符合高产稳产 、品质优 1．1 材料和设备 良、耐储性强等特点的生产