19章在基因水平诊断疾病(研究生)3学时-3.pptVIP

概述 几乎所有的疾病均在一定程度上与基因有某种联系，基因的改变，或是疾病发生的原因，或是疾病发生的结果，或是疾病发生时的伴随现象，而这些现象的出现是有规律的。因此，可以通过检测基因的改变来反映疾病的发生和发展，疗效和预后。 目前临床疾病的诊断方法 临床诊断 细胞学诊断 生化学诊断 血清免疫学诊断 基因诊断 从基因水平提供更早期、更准确的诊断依据 基因诊断经历三个基本阶段 第一阶段：２０世纪８０年代，以DNA分子杂交为基础，通过RFLP分析进行。样品量大，过程复杂，同位素 第二阶段：以PCR为基础的一系列技术。 操作方便、快捷。 第三阶段：应用基因芯片技术。大大提高样品处理的自动化程度和检测结果的准确性。 第一节 基因诊断的理论基础 基因诊断的实质是应用分子生物学和分子遗传学理论和技术，分析受检者基因的结构和功能是否正常，从而对受检者作出诊断。 一、遗传的物质基础 Mutation: The heritable alterations of genetic material caused by internal or external factors, which lead to genotype and/or phenotype change. In general, mutation includes: chromosome aberration gene mutation ① Static mutation a) Point mutation : base substitution, insertion, deletion Disorder Location Repeat Normal range Disease range of gene sequence repeat repeat FRAX Xq27.3 CCG** 6~54 pre-mutation 60~200 full mutation 200~2000 HD 4p16.3 CAG* 9~34 pre-mutation 36~121 DM 19q13.3 CTG*** 5~35 pre-mutation 50~80 full mutation 80~2000 * encode region，** 5’untranslate region，***3’UTR 核酸分子杂交和聚合酶链式反应是利用核酸的变性和复性，对核酸进行检测的两大基本技术。 前者：标记的已知核酸（探针）检测微量未知核酸分子（目标）的存在； 后者：体外对核酸分子进行无限扩增。 （对极微量标本进行分析） 核酸分子杂交（固相杂交）操作程序 核酸分子杂交的分类 液相杂交： 待测核酸样本与特异性探针同时溶于杂交液中进行杂交反应。 固相杂交： 待测核酸样本先结合到固相支持物上，再与溶液中的特异性探针进行杂交反应。 常用固相杂交支持物： 硝酸纤维素膜、尼龙膜等－－－ 体外高效、快速、特异地扩增目的基因或DNA片段。 原理：类似于DNA的体内复制 在试管中的DNA的体外合成。 用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 PCR Cycle Geometric Amplification 7. 扩增阻滞突变体系 （一）遗传病基因诊断的策略与方法 1.直接策略：采用基因突变的诊断方法直 接检测致病基因。该策略的前提是基因已被克隆。 2.间接策略：即通过检测与致病基因连锁 的遗传标记进行基因诊断。 人类基因组上的DNA遗传