治疗剂量下四种抗结核药物与Caco-2细胞上P-gp相互作用研究.pdfVIP

治疗剂量下四种抗结核药物与Caco-2细胞上P-gp相互作用研究 1) 方平飞，高维，李焕德(中南大学湘雅二医院临床药学研究室长沙41001 摘要：目的研究治疗齐q量pq种抗结核药物(异烟肼、乙胶丁醇、毗嗪酰胺、左钒氟沙星)对Caco一2 细胞i：P一糖蛋EJ功能、表达及MDRImRNA表返的影响。方法采用流式细胞仪测定细胞内罗丹明 一123考察药物对P一糖坐I二j功能的影响，流J￡细胞术分析药物对Caco-2细胞j：P糖蟹白表达的 影响，实时荧光定量PCR技术分析药物对Caco-2细胞MDRI摹岗mRNA水、F表达的影响。结果带 导作用；异烟肼、乙胺丁醇均上调丫Caco-2细胞l：P-糖蛋臼的表达(PO．05)。其P一糖蛋白表 达量分别为阴性对照纽的3．5倍和3．8倍；M时}：调rCaco-2细胞一f：MDRlmRNA的表达(P O．05)，其MDRlmRNA的表达量分别为阴性对照纽的11．5倍和11倍。左氧氟沙星增加r厂罗丹明 -123在Caco一2身j|胞内的蓄积(PO．05)，为抑制作用：下调了Caco-2细胞，卜P一糖蛋白和lIDRlmRNA 的表达(PO．05)，其P一糖蛋白和MDRImRNA表达量分别为阴性对照组的50％和32％。而吡嗪酰 胺与P一糖蛋白无明显相互作用。结论治疗剂量的异烟肼和乙胺丁醇为P一糖蚩白的诱导剂，左氧 氟沙星为P一糖蛋白的抑制荆，而吡嗪酰胺对P一耱蛋白功能和表达无明显影响。 关键词抗结核药物，Caco--2细胞，P一糖篮白，帅Rl基因 20世纪80年代后结核病疫情呈现伞球性明显 生的影响，为临床探讨MDR-TB的耐药机制及研究抗 回升趋势，尤』#足耐多药菌株的d；现。耐多药结核 结核药物与P—gp的相互作用挺供一定的参考依据。 resistancetuberculosis，MDR—TB)1 病(multidrug 材料与仪器 指的是结核菌乍少同时耐异烟肼和利福平或者同 1．1主要材料与试剂 时对一线抗结核药中的3种或3种以J：药物产生耐 Caco--2细胞(．I：海蜘|胞库)，O．1％胰蛋白酶、删删 bovine 药性““。多药耐药(multidrugresistance，MDR)培养恭(Gibco，USA)，胎牛m清(fetal 是肿瘸化疗失败的主要原洲之一”。。其中，由MDRI serum， FBS， Gibeo， USA)。 基凼编码的P一糖蛋白(P—glycoprotein，P-gp)的plTO／p-glycoproxein／MDRAb一2单抗(Chemicon 高表达导致药物外排增加，是MDR发生的主要机制 之一。除肿痛组织外，许多正常纰织中都呈现不同 (Kirkegaard＆Perry 程度的表达，这些组织包括肾小管黏膜、肝细胞的 I 胆小管样黏膜、小肠和火肠黏膜细胞的顶端、脑和 试剂盒(Tiangen，北京)，多聚甲醛(上海吴化化 睾丸的毛细m管内皮细胞、肾I：腺以及怀孕的了宫 T自．限公lq)，罗丹明123(Rh一123)、二甲基哑砜 内膜，对药物红体内的吸收、分布和转运具有重要 影响m“。目前，对MDR-TB耐药机制的研究主要集中INH、LVFX和VER对照品(中国药品生物制品检定 在耐多药分枝杆菌的层面m，，很少有从宿主角度的 所)。 研究报道。结合抗肿瘤多药耐药机制的研究成果， 1．2仪器 搬据肺外结核多发于肠、肾、脑等P—gp分布较多的 器官的特征，从宿主的角度研究抗结核耐药现象具 Callibur，USA)．光谱扣描多功能读数仪(Thermo 有重要临床意义。 Scientific，USA)，m球计数板(J：海精密仪器仪 目前，临床常用的一线抗结核药物包括：利褊 表有限公id)，AG285电子分析天平(Mettler 平(RFP)、异娴肼(IN}I)、乙胶丁酵(EMB)、毗嗪 酰胺(PZA)和左氧氟沙星(