猪流感病毒聚合酶PB1蛋白亚细胞定位的研究.pdfVIP

猪的传染病一猪流感 (3)用猪流感ELISA对从四个地区所采集的血清做检测，检测阳性率分别为：地区一猪流感 为阳性的比率：23％(23／100)。结果显示：猪流感的阳性率相差较大；有些地区的抗体阳性率很 高，为55．1％；而有些地区的抗体阳性率很低，仅为15．6％。各地区感染抗体阳性率之间没有规律。 2．3 感病毒抗体。其原因是猪是人源、禽源和猪源流感病毒的共同易感宿主，是流感病毒的重配器，已 型。 2．4我们通过对2种H1Nl亚型流感病毒HA蛋白的氨基酸序列进行了比较，发现它们的相似性较 高的(相似化学性质氨基酸／蛋白长度等于93．8％)。这也为本研究发现的2种不同的抗原包被ELISA 板检测血清有较高的交义性提供了分子依据。从二级结构来看，有差异的地方较少，可能这些有差 异的地方是引起抗原性差异的原因之一。另外一个原因，可能是在2个蛋白序列中同一位置对应的 相似氨基酸残基或者不同的氨基酸残基与抗体蛋白相互作用的化学键有差异。 构模建与构象表位进行了分析，不同HlNl流感病毒HA蛋白抗原表位氨基酸的电性差异，可能直接 影响到抗体分子的识别和结合。HA抗原性的差异及抗原性的交叉直接反应了血清抗体的差异，本 研究用两种Hl流感病毒HA抗原包被ELISA板进行同步检测所显示的交叉反应符合HA抗原的理 论推导。 3结论 3．1 利用甲型H1Nl流感病毒HA表达出的蛋白进行westemBlotting检测，对猪流感H1亚型抗血 清显示阳性，有交叉反应。用两种H1流感病毒HA抗原包被ELISA板进行同步检测显示了较高的 交叉反应。本研究显示了两种H1流感病毒HA抗原性及免疫反应性存在交叉。 于H1亚型猪流感病毒抗体监测及流行病学调查(甲型H1N1流感病毒HA基因片段来源于猪流感病 最高的地区为55．1％(43／78)，血清阳性率最低的地区为15．6％(19／122)。 参考文献(略) 猪流感病毒聚合酶PBl蛋白亚细胞定位的研究 王晓杜陈培君沈阳马志永木1 中国农业科学院上海兽医所，上海，200241 摘要流感病毒PBl蛋白在其复制中起着转录作用，是流感病毒复制所必需的蛋白。本研究构建真核表达载体， 表达，为以后的相关研究打下基础。 关t词猪流感；PBl；亚细胞定位 流感病毒属于正粘病毒科负链RNA病毒，自从1918年发生西班牙大流行以来，在全世界多次 发生大流行，最近发生在墨西哥的流感H1N1病毒大流行，已经传播到世界各地，再一次引起大流 行，感染对象由老人和儿童转向针对青壮年高致病性，在流行病学上的变化，进一步体现了流感病 1基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目，项目编号：2007JB02 1王晓杜，博士研究生，湖北红安人。1973．5．研究方向病毒与细胞相互关系。Email：墨i趔丛型鲤g鱼!鲍!璺Q堡 4通讯作者，Emajl：m舵hiyon999@yalloo．com．cn 636 第十三次学术研讨会会议论文集 毒的强变异性。研究流感病毒的复制机制，寻找预防和治疗流感的疫苗和药物，就是当务之急。流 感病毒的复制是三个P蛋白和NP蛋白形成复制酶复合物，同时可以与病毒基因组RNA结合形成 RNP，是病毒复制和包装所必需的I¨。 流感病毒的PBl蛋白由病毒基因组片段2编码，是由757个氨基酸组成，具有聚合酶活力的蛋 白。病毒的RNA聚合酶是由PBl、PB2、PA蛋白形成的异源三聚体，所有的三个亚基都是病毒复 制所必需的【2】。其中PB2亚基能绑定真核细胞的mRNA帽子结构，并剪切下帽子连作为病毒转录所 mRN A141。该蛋白带有两个必需的核定位序列，推测可能定位在核内，发挥其功能15】。本研究克隆猪 胞定位，为PBl蛋白的相关工作做了前期研究。 l材料与方法 1．1材料 切酶、T4连接酶、T载体试剂盒购自宝生物公司，质粒抽提和DNA片段回收试剂盒购自博大泰克 生物技术公司， DMEM和胎牛血清购于Gibco公司，HRP标记的羊抗小鼠购自SaIltaCnlz公司， 其他试剂均为国产分析纯。 1．2方法 1．2．1基因克隆与宾核表达质粒的构建 PBl PBl一F：5’n玎GTCGA 引物， AMV酶反转录合成cDNA，的CDS区引物：