海岛棉DELLA基因克隆及其功能分析.pdfVIP

海岛棉 DELLA 基因克隆及其功能分析 摘 要 目的：棉花是一种全球性的重要经济作物，也是我国重要的经济和战略物资。海岛棉 （长 绒棉）（Gossiypium barbadense）在棉花栽培种中品质最优。而棉纤维品质的改良是棉花 育种工作的重点。赤霉素在棉花纤维发育过程中起着重要作用。DELLA 蛋白是赤霉素 信号传导通路中的一类重要负调节因子。通过克隆海岛棉中 DELLA 蛋白及对其功能进 行研究，对阐明海岛棉 GA 信号通路以及以后利用分子生物学方法改良海岛棉纤维品质 都将有一定的意义。 方法：用同源克隆法，以海岛棉基因组 DNA 为模板,通过 PCR 技术获得了 DELLA 基因 的同源片段：GbGAI2 和 GbGAI3。分别将 GbGAI2 和 GbGAI3 完整编码区和缺失 DELLA 区的 N 端短截片段置于植物表达载体的 35S 启动子的下，构建成植物表达载体 p35S:GAI2 , p35S:gai2,,p35S:GAI3 , p35S:gai3 ，并用农杆菌介导法转化野生型拟南芥。 结果与结论：通过同源克隆的方法成功地克隆了两个海岛棉的 DELLA 基因，GbGAI2 与 GbGAI3 ，其中 GbGAI2 的完整ORF 长 1,848 bp，编码 616 个氨基酸，GbGAI3 的完 整 ORF 长 1,626 bp，编码 542 个氨基酸。通过与已知的 DELLA 蛋白序列比对发现， GbGAI2 与 GbGAI3 具有典型地 DELLA 蛋白的结构域。过量表达 GbGAI2、 GbGAI3 和 Gbgai3 均导致拟南芥转基因植株生长受阻和延迟开花，GbGAI3 比 GbGAI2 的作用明 显，而 Gbgai3 严重抑制植株生长和发育。 关键词：海岛棉；赤霉素；DELLA 蛋白；拟南芥；转基因植株 II Cloning and Functional Analysis of DELLA Gene in Gossypium Barbadense Abstract Object: Cotton is an important global economic crop. It is our countrys important economy and strategic materials too.The cotton fiber is the main product, which has become more and more important for its advantages. The Gossypium barbadense L. is the best Cultivated Variety .The world has paid more and more attention to the quality of the cotton fiber. Gibberellins (GAs) play important roles in cotton fiber development. DELLA proteins are negative regulators in the signaling pathway of GAs. In order to understand the role of GA signaling in fiber development, we initiated the characterization of this pathway in cotton plants. Methods: The gene GbGAI2 and GbGAI3 encoding the DELLA protein in G. barbaden