分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能.pdfVIP

江苏农业科学 2013年第41卷第6期 一 41一 钱荷英，高 丽，张月华，等．分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能[J]．江苏农业科学，2013，41(6)：41—43 分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能 钱荷英，高 丽，张月华，孙平江，徐安英 (江苏科技大学蚕业研究所，江苏镇江212018) 摘要 ：通过经口添饲家蚕核型多角体病毒BmNPV，比较家蚕新品种871C、872C及其杂交种和871、872及其杂交 种对 BmNPV抵抗性的强弱，结果表明，家蚕新品种具有很强的抗 BmNPV性能。用分子标记技术对不同品种进行辅 助选择，抗性品种871C、872C显示为阳性，而易感品种871、872显示为阴性；并在抗病品种中扩增出长度为999bp的 DNA片段，推测该分子片段与家蚕品种的抗 BmNPV性能相关。 关键词：家蚕；BmNPV；抵抗性 ；分子标记 中图分类号：$884．51 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)06—0041～03 家蚕核型多角体病毒病，俗称 “血液型脓病”，是由于家 BmNPV能力，为培育优质、高产、具长久稳定抗BmNPV能力 蚕感染了家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhe． 的实用新品种奠定基础。 dmsisvirus，BmNPV)而引发的，是 目前生产上主要的家蚕病 1 材料与方法 害，对蚕茧生产造成了很大危害。 自1947年 Bergold分离纯 化出家蚕脓病病毒…以后，各国科学家对该病毒的结构、侵 1．1 家蚕品种 染方式和途径、遗传规律，以及针对该病毒提出的各种防病、 供试的家蚕品种为871、872、871×872、872×、871、871C、 抗病措施等进行了研究 。 ，并取得了一定进展。从育种角 872C、871C×872C、872C×871c(带C为抗BmNPV品种)，均 度来说，培育对病原有强抵抗力的品种将是最有效、也是最环 由中国农业科学院蚕业研究所品种资源室提供。 保低碳解决生产问题的途径。近年来，随着分子生物学技术 1．2 主要试剂及工具酶 的进步，各种分子标记的开发和利用在抗病育种中得到了很 蛋白酶K、PCR回收试剂盒、TaqDNA聚合酶、PCR配套 好的利用。。J。 缓冲液、4dNT等购自TaKaRa公司，JM109感受态细胞、Ecoli 笔者从保存的家蚕种质资源中获得了一份抗病材料，经 菌株等为上海生工生物工程公司产品。 遗传分析所发现的抗病基因为显性主基因遗传模式 。以 1．3 引物合成 春用蚕品种871、872和耐病主基 因的载体品种为育种亲本， 根据 GenBank中已经公开的与家蚕BmNPV抗性基因连 采用基因导入、杂交、回交、纯合固定等方法，导入耐病主基因 锁的DNA序列(AY380833．1)，用Pfime~．0软件设计 1对特 获得蚕新品种，该品种于2011年通过四川省蚕品种审定委员 异性弓l物 antiNPV—F(5一TcACACAGTCAAAAcccGT一3) 会审定。 和 antiNPV—R(5一TGTAGAAAATCCTCCCCCT一3)。弓l物 从已育成的抗性品种推广情况看 ，一般隔若干年后往往 由上海生工生物工程有限公司合成。 会因为基因漂流、新变异产生u 、地理环境的改变等原因造 1．4 攻毒方法 成品种的抗病能力降低。因此，每隔几年应该对品种的抗病 采用经口添毒的方式，将 1×10NPV多角体／mL浓度的 性做测试 ，检验抗病能力是否下降，以便及时研究应对措施， 病毒逐级稀释成 1×10、1×10、1×10、1×10多角体／mL， 防止因抗病基因的遗失给生产