合成PHA基因组克隆片段的序列分析及相关基因的分离.pdfVIP

摘要 聚一B一羟基烷酸是微生物代谢过程中产生的贮存物质，是制造塑料的 新型原料，可被微生物完全降解，利用植物生物反应器合成PHA是现在研 究热点。本论文主要研究实验室拥有的从Pseudomanas菌中克隆的合成PHA 的基因组片段，利用生物信息学方法分析其序列特征，从中找出与PHA合 成相关的基因，并用PCR方法分离这些基因。结果显示： 1使用核酸分析软件对合成PHA克隆片段的序列进行分析，找到了五个开 放阅读框，其中ORFI、ORF2和ORF3在同源性搜索中与合成PHA相关基 因的同源性很高，而ORF4、ORF5与PHA合成的基因几乎没有同源性。 2对与ORFI、ORF2和ORF3高度同源性的蛋白序列进行序列比对分析，表 明它们与合成PHA的相关基因编码的蛋白序列之间存在高度的保守性， PHA合酶在蛋白质序列上存在较大的差异，可能是一种新的PHA合酶。 3通过对序列的启动子序列区搜索，发现PhaC、PhaA与PhaB是由同一个 启动子控制转录的，即它们处在同一个操纵元作用之下；而ORF4和ORF5 由另一个启动子调控。 4综合分析，推测PHA合成的分子机制：首先由B一酮硫裂解酶(PhaB) 催化乙酰CoA生成乙酰乙酰CoA，乙酰乙酰CoA在依