雷氏大疣蛛毒素抗肿瘤蛋白组分分离纯化及活性鉴定.pdf

摘要 蜘蛛毒素是由神经毒性肽、蛋白质和低分子量物质所构成的复杂混合物，具有多种 活性，在神经生物学、分子药理学、分子毒理学等方面得到广泛应用。近年来，蜘蛛毒 素在新型抗肿瘤药物的研发方面也日益显示出广阔的应用前景。雷氏大疣蛛(Macrothele raveni) 是我国最近鉴定的蜘蛛新种。研究证明雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制人肝癌 胞增殖也有较强的抑制作用。但是有关蜘蛛毒素的抗癌组分的分离及其抗肿瘤药理学特 性国内外报道很少。 本文以体外培养的Hela细胞作为研究对象，用MTT法和台盼蓝拒染法检测雷氏大 疣蛛毒素及分离的蛋白组分的体外抗肿瘤作用，以筛选出能够抑制肿瘤细胞生长的蛋白 组分。经检测雷氏大疣蛛毒素对Hela细胞的最低敏感浓度为101xg／mL。利用反相层析 分离雷氏大疣蛛毒素，得到13个组分，其中组分13对Hela细胞有较强的抑制作用(尸 聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，活性组分13是由分子量在80kDa左右的蛋白组成。为进一 步得到具有抗肿瘤活性的单一蛋白组分，采用阴离子交换法对组分13进行了再次分离 纯化，得到5个组分，利用MTT法检N-次分离的蛋白组分对Hela细胞的抑制作用， 其中组分13．5对Hela细胞的抑制作用最强。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为多组分。 本试验研究为今后雷氏大疣蛛粗毒作为抗癌药物的研发提供理论基础。 关键词雷氏大疣蛛毒素分离纯化人宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用 Abstract Abstract are sourcesofnoveltoxins．Itis fornerval venomsrich Spider important biology， andSOon．Inrecent toxinalsodemonstratedthebroad pharmacology years，thespider inthenewanti—tumormedicineresearchand applicationprospect developmentaspectdayby raveniisanew of inChina．Theresearchthatthetoxin day．Macrothele speciesspider proof ofMacrotheleraveniCaninhibitthehumanliverCanCercells and proliferationeffectively DNA thetoxinalsohadmore inhibitiononthehuman composition，moreover strong gastric adenocarcinoma carcinomacellandcervicalcancercells．Buttherelated cell，esophageal spider toxinanti-cancer and characteristicdomesticand componentseparationPharmacology foreign are few． reportsvery Our isthehumancervicalcarcinomacellsHelathatculturedinvitro investigativeobject wasusedtodetecttheinhibitioneffect