四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞影响.pdfVIP

蛰。二 ¨’／弗 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文 四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响 前言…………………………………………………………………………………………．．6日¨吾…………………………………………………………………………………………”6 材料与方法……………………………………………………………．．6 结果…………………………………………………………………………………………．．10 附图、附表………………………………………………………………13 讨论…………………………………………………………………………………………．．18 参考文献………………………………………………………………．．22 综述内皮细胞与VEGF关系的研究………………………………………25 致谢…………………………………………………………………………………………………．35 个人简历……………………………………………………………………36 中文摘要 四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响 摘 要 目的：研究四妙勇安汤醇沉药液对体外培养的人脐静脉内皮细胞 umbilicalVeinEndothelial (Human 讨四妙勇安汤醇沉药液对缺氧造成的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 机制。 方法：用0．1％胶原酶及0．25％胰蛋白酶(1：1)混合酶灌注消化法对健 康人脐静脉内皮进行消化，对所消化下来的细胞进行体外原代培养，用光 学显微镜从形态学观察，并采用免疫荧光抗体方法对Ⅷ相关抗原进行检 测，用这两种方法对所培养的细胞进行鉴定并对其进行传代培养。将实验 用细胞分为三组，分别为(1)正常细胞组：正常的人脐静脉内皮细胞加入正 皮细胞进行缺氧处理后，加入正常培养液，然后放入37℃5％C02培养 箱进行培养24h；(3)四妙勇安汤组：对人脐静脉内皮细胞进行缺氧处理后， 加入含10％四妙勇安汤醇沉药液的细胞培养液后，放入37℃5％C02培养 察四妙勇安汤对实验各组内皮细胞细胞活性的影响，实验用TECAN 化仪测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞各组细胞培养液中乳酸脱氢酶 (1actate endothelial 各组细胞中血管内皮生长因子(vascular growth 生成量的表达，用日产Olympus荧光显微镜观察各实验组细胞中黄绿色 荧光颗粒数目。 结果：(1)对所培养的细胞进行鉴定：①倒置相差显微镜下的形态学 观察：可见所培养的细胞刚刚接种时细胞多数聚集成团，周边有细胞向外 游离，只有少量细胞单个生长；细胞接种24h后即可见大量细胞贴壁，细 胞单层扁平，形态多样，呈现圆形，多角形，部分分化，初长出的细胞为 短梭形，3．4d细胞生长最迅速，很快融合成片，7d左右细胞即可长成致 密单层，呈典型的铺路石状排列，边界清楚，胞浆丰富，胞核圆形居中， 中文摘要 结构清晰，胞质均匀。传代细胞生长更加旺盛，有时可见多核细胞；细胞 的形态也更趋多形，可见圆形细胞。随着细胞传代次数增加，细胞增值缓 慢，细胞呈现长梭形改变，并迅速碎裂，凋亡。②免疫荧光抗体方法进行 Ⅷ因子相关抗原检测：荧光显微镜下观察可见所培养的原代及传代细胞胞 浆中均有大量较强黄绿色荧光颗粒，胞核周围尤为明显，而用PBS替代 兔抗人Ⅷ因子多克隆抗体的对照组细胞，则无此反应。经此两种方法初步 鉴定所培养的细胞为内皮细胞。(2)四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的 影响：三组细胞MTT实验中各孔吸光度值、培养液中LDH漏出量以及 免疫荧光化学检测的VEGF生成量的表达量结果经方差分析均为pO．01， 均数做两两比较，结果差异均有显著性。①正常组内皮细胞MTT实验中 测的VEGF的生成量的表达量为(28．34-3．7227)，均介于正常组和模型组 同样是介于正常组和模型组之间，．高于正常组，而低于模型组。三组细胞 三种检测指标均数做两两比较，均为pO．01，差异均有显著性。 脐静脉内皮所获得的细胞，经原代及传代培养鉴定为人脐静脉内皮细胞