下调Smad7表达对PC12细胞OGD损伤的影响.pdfVIP

中国实验诊断学 2014年 4月 第 18卷 第 4期 — 523 文章编号 ：1007—4287(2014)04—0523—03 下调 Smad7表达对 PC12细胞 OGD损伤的影响 王一鸣 ，程 也 ，付丹阳 ，王勇涛 ，王姣琦 ，梅春丽 ，莽 靖 ，徐忠信 (1．吉林大学 白求恩医学部临床医学院，吉林 长春 130021；2．吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033) 摘要 ：目的 探讨抑制 Smad7基因表达对 PC12细胞氧糖剥夺 (OGD)损伤 的影响及其机制 。方法 利用 PC12 细胞 OGD模型体外模拟神经细胞缺血性损伤 ，通过 RNA干扰技术 ，沉默 Smad7基 因表达 ，实时定量 PCR、Western blot检测 Smad7基 因的表达情况 ，MTT检测下调 Smad7基 因表达对细胞 OGD损伤存活率 的影响，Westernblot检 测 ActivinA(ActA)蛋 白的表达情况 。结果 体外合成的 siRNA转染可下调 Smad7基因转录及蛋 白水平 的表达 ；经 OGD16h，阳性转染组细胞存活率较 阴性组显著增加 ，阳性转染组细胞 ActA蛋 白表达较 阴性组显著升高。结论 Smad7可负向调控缺血损伤诱导的ActA／Smads通路激活过程 ，抑制其表达能够发挥神经保护作用 。 关键词 ：ActA／Smads；Smad7；siRNA；氧糖剥夺 中图分类号 ：R743 文献标识码 ：A EffectsofsilencingSmad7onOGD sensitivityofPC12cells WANG Yi—uring，CHENGYe。FUDan—yang，eta1．(Nor— manBethuneHealthScienceCenter0f_，ilinUniversity，Changchun130021，China) Abstract：Objective ToexploretheeffectofsilencingSmad7geneinPC12cellstreatedbytheoxygen~glucosedep— rivation (OGD)andtherelatedmechanism．Methods PC12cellsexposedtoOGD wasusedasthemodelofneurons subjectedtoischemicinjuryinvitro．SiRNAwasappliedtoreducetheexpressionofSmad7gene，whichwasdetectedby RealtimeRT—PCR andW esternblot．Thesurvivalrateofcellsafter0GDwasdetectedbyMTT．W esternblotwasused totestthe．expressionofActivinA．Results TheexpressionofSmad7wassignificantlyreducedaftersiRNA transfec— tion．ThesurvivalrateofcellsinOGD16hcombinedwithSmad7genesilencinggroupwashigherthanthatinOGD16h group．TheexpressionofActA proteinwasincreasedinSmad7genesilencinggroupafterOGD16htreatmentcompared tosingleOGDtreatment．Conclusion Smad7genesilencingcanincreasethesurvivalrateofPC12celltoOGD iniury andenhancetheactivationofActA／Smads． Keywords：ActA／Smads；Smad7；siRNA；oxygenglucosedeprivation (ChinJLabDiagn，2014，18：0523) 激活素 A(ActivinA，ActA)是转化生长