穿膜肽TAT的原核表达及其穿膜效果的初步研究.pdfVIP

耩簸燕嬲 ·Anima{ScimiC@aridBiotechology 2){t4年 第50卷 薷9期 穿膜肽TAT的原核表达及其穿膜 效果的初步研究 伏彭辉 ，王一帆 ，王 玲 。罗宗刚 (西南大学荣 昌校 区，重庆荣 昌402460) 摘 要 ：为进一步建立蛋 白诱导水牛iPS细胞体系，本实验对穿膜肽TAT与标记蛋 白EGFP进行融合表达 ．同时引 入核定位NLS序列，获得纯化蛋 白后进行细胞共培养试验 ，以探讨穿膜肽TAT对携带水牛干细胞转录 因子纯化 蛋 白进入细胞 内的效果 。首先通过PCR扩增 、TA克隆、双酶切 以及r4连接等步骤构建原核表达载体pET—EGFP 和pET—NLS—EGFP—TAT；再将重组质粒转化 大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导 ，用SDS—PAGE电泳检测融合蛋 白表达 ；然后用HisTrapHP层析柱纯化融合蛋 白，经复性 、透析和浓缩后 ，最后将纯化 的EGFP蛋 白和NLS— EGFP—TAT蛋 白分别添加到水牛成纤维细胞 中共培养 。结果表 明