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第28卷，第7期 光谱学与光谱分析 2 OO8年7月 a11d SpectroscopySpectralAnaI”is July，2008 双酚A人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究 郑劫，张妮，赵肃清’ 广东工业大学轻工化工学院，广东广州510006 摘要双酚A(bisphenoIA，BPA)是一种酚类环境雌激素，即使极低剂量残留对人类健康也有危害。为了 建立其简单快速并适应现场检测的免疫分析方法，必须先合成它的人工抗原并进行鉴定。通过对双酚A进 行结构修饰，用碳二亚胺将结构修饰了的双酚A与牛血清蛋白相偶联，经透析得到纯的双酚A人工抗原并 冷冻干燥备用。然后用紫外光谱、红外光谱和免疫方法对人工抗原进行鉴定。结果表明，合成的人工抗原紫 外光谱图中具有蛋白质和双酚A的特征吸收峰；人工抗原红外光谱图中呈现双酚A和牛血清蛋白的红外特 征吸收峰；通过竞争EI。ISA试验表明用合成的人工抗原免疫的Balb／c小鼠血清中产生了双酚A的抗体。三 种方法综合鉴定结果表明双酚A人工抗原合成成功，该人工抗原可以进一步用于制备抗双酚A的单克隆抗 体。 关键词双酚A；人工抗原；光谱；免疫；鉴定 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：100∞593(2008)07—1583一04 一步建立双酚A免疫分析方法提供基础，也为其他小分子化 引言 合物的人工抗原合成与光谱鉴定提供参考。 双酚A(bisphenolA，BPA)是一种酚类环境雌激素[h21， 1实验方法 又名2，2一双(4一羟基苯基)丙烷、二苯酚基丙烷。双酚A是重 要的精细化工原料，是生产聚碳酸酯、环氧树脂、聚砜以及 1．1材料与仪器 改性酚醛树脂等的重要中间体。 双酚A(C．P．，上海化学试剂公司)，牛血清蛋白(BsA， 双酚A可通过食品包装容器和塑料薄膜渗入食品或饮 上海伯奥生物科技公司)，N一羟基丁二酰亚胺(NHS，国药集 料进入体内，用于牙科的树脂和牙齿密封剂由BPA或BPA广 双甲基丙烯酸酯组成，能从牙体缓慢渗入唾液而进人体内。 羊抗鼠19G辣根过氧化物酶(武汉博士德生物工程有限公 司)，氯代乙酸、无水氯化铝、N，N一二甲基甲酰胺(聊旧)、 双酚A还能诱导人类乳腺癌、前列腺癌的发生L3“j。BPA也 邻苯二胺(()PD)、Twee卅20、双氧水、均为市售分析纯产品。 可以使雄鱼体内的卵黄蛋白原vitellogenin(VrG)浓度显著 9．o碳酸盐缓冲溶液 提高，抑制睾丸的生长及受精卵的发育[5]。目前，国内外检 pH7．o磷酸缓冲溶液(PBs)，pH 测BPA的方法有紫外分光光度法、双波长分光光度法、气相 (CBS)，pH5．o磷酸柠檬酸缓冲溶液。 Njcolet 色谱(GC)法、气相色谱一质谱(GC／MS)法、高效液相色谱 外一可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，Bi矿 (HPI￡)法、高效液相色谱一紫外法(HPLC／UV)、液相色谱一 Rad 680型酶标仪(美国伯乐公司)。 质谱(IC／MS)法、反相液相色谱法、极谱法、荧光法、分子 1．2人工抗原的合成与鉴定 印记及EI。ISA法等睁18]。仪器方法检出限可达到埏·L～，