酶动力学测定中值得注意的若干问题.pdfVIP

维普资讯 P ) 陕西医学检验第B卷第 l期 1993年2月 件是 ，恒温恒温co，细毫培葬箱的使用，但这在国内一般实验宣是没有条件的。因此粮多 才慢试用点 烛法、CO,点生器法或密闭法菁方法来尝试，屯有获得试验成功的蕞道 。这些方法虽然简单 易行 ，涅难以控 制CO,浓度，对实验的稳定性和重复性彤喃藕太 ，为了并嵌这一堆赶，奉文作者垣计 了一竹简单可靠的方 法—— 密闭 COz气体直接加注法，从而克厦 了上逮缺点．实验置撂囊研．在没有怔重怔正CO,培葬箱的条 件下，使用苴法屯 同样能够作好 MLCT。 关键词 MLcT COt 量积法 加注法 淋 巴母 细胞 混合淋 巴细胞培养试验 (MixedLyraohocte 干燥器内加^已知容量的生理盐水，并于其中滴加 culturetest，简称 MLCT)是检铡 HLA—D位点基 溴麝香草盼蓝指示剂教滴，后置于拮净工作台上， 因产4打的一种特异性方法。MLCT从方法学上讲 ． 嗣紫外线照射进行空气消毒 ，然后加盖密封备用． 有细胞形态学方法和氚—— 胸腺嘧啶棱苷捧^法 使用时打开干燥器 ，将接种好的试管置于干燥器 两种 无论采取郭种方法 ，而细胞培养过程则是一 中，并于干爆器磨 口诛 以凡士林加盖密封 ，再打开 个重要 的环节，其中COt浓度髓否控橱的合适和恒 活塞用 SOml针管抽掉干爆器 内容气的3 ～5 ， 定 ，是培养毙否获得成功和保证实验稳定性的一十 然后定量地向干燥 内加注经过滤 的CO 气体 ，使 重要条件。目前茸内有条件使用恒温恒温CO 细胞 COz体积达到干爆 内气体的 3 ～5 。关 闩j活塞， 培养箱进行此项实验和研究的实验室 尚还为数不 将干燥器移置于隔承式恒温箱 中(37X2)进行培养． 多t而大多数实验室仍还采用点蜡烛法 ，或 CO 发 时间 5天 ． 生器法或密闭法进行此硬工作．为了解决MLCT 在稳定 MLCT流程同时 ，我们采用细胞形态 中合适的CO，浓度和 CO，浓度恒定的问题 ，我们 学方法对ABO同盟献血员作了60倒双相和 54倒 摸索出了一种简单可靠的方法 (密闭CO，气体直接 单相MLCT，结果爿定主要是记录转化的淋巴母细 加注法)，即选用中号玻璃真空干爆器一十 ，用量积 胞，不计算过谜型。其结果见附寰t 法或计算法求得干爆器的全部窖量，并于干燥器通 气接头处外接一十甜有控斜夹子的胶皮管，使用前 附衰 6o倒双相 、54例单项ABO同型献血员MLCT结果 如前所述，在MLCT中CO：浓度对于实验 的 简单易行旭 难 以控橱 COt浓度 ，影响着实验 的稳 成功和稳定性起着重要作用。当然其它实验条件 ， 定性和重复性 。而我 ]『『使用密闩jCOt气体直接加注 如无菌操作。细胞数量、细胞纯度 刺激细胞与反应 法则克服了这十缺点．从我们观察 的6o倒双相，54 细胞的浓度 以及培养蔽的pH和含血清浓度等，对 倒单相 MLCT中，细胞生长和转化都很满意f标准 实验同样有着直接影响，但在这些影响因素中比较 差小f每式三十复管中误差均3 }反应组和阴性 难 以解决的问题是控斜CO：浓度 。使用恒温恒湿 对照组结果明确 ，这 些均厦映了实验的稳定性和精 CO 细胞培养进行此项实验 ，对保证CO，浓度和恒 确性 。因此 ，我们认为在没有恒温恒温CO，细胞培 定的实验条件无疑是再好不过的，但这在一般实室 养箱的条件下，采用密闩jCO，气体直接加注法也同 是没有条件的 点烛癌 ，COt发生器法 ，密闩j法等虽