一种快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交技术的建立.pdfVIP

第 26卷 第 2期 武汉大学学报 (医学版) Vo1．26No．2 2005年 3月 MedicalJournalofWuhanUniversity Mar，2005 一 种快速稳定的人精子核双色荧光 原位杂交技术的建立 刘 浩 张 昌军 王 华 罗清炳 刘海湘 湖北省十堰市人 民医院生殖医学研究中心 十堰 442000 摘要 目的：建立快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交的实验方法。方法：采用双色荧光原位杂交 (fluores— cenceinsituhybridization，FISH )方法取精子标本用 EDTA／PBS液处理 ，再用二硫苏糖醇 (DTT)使精子去凝集 ， 甲醇 ／冰醋酸固定后制片，变性后与双色荧光直接标记 (CEPX、Y)探针杂交。结果：在荧光显微镜下可见标本背景 清晰，精子头部染成蓝色 ，边界清楚 ，头部有 1个绿色荧光信号的精子为 X精子 ，有 1个红色荧光信号的精子为 Y 精子 。精子头部有 2个或 2个 以上信号的精子为染色体数 目异常精子 。结论 ：本方法具有快速 、稳定、荧光信号 强、易分辨等优点 ，可用于人性染色体非整倍体率的分析研究。 关键词 荧光原位杂交；人精子染色体 ；非整倍体 中图分类号 R321．1；Q32 文献标识码 B 文章编号 1671-8852(2005)02—0207—03 EstablishmentofAn EffectiveApproachtoDual—colorFluorescence insitu Hybridizati0n ofHumanSperm InterphaseNucleus LiuHao，ZhangChangjun，WangHua，etal ReproductiveMedicalCenter，ThePeople’SHospitalofShiyan，Shiyan442000，China Abstract objective：Toestablishaneffectiveapproachtodual—colorfluorescenceinsituhybridization ofhuman sperm interphase nucleus．Methods：Dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH)wasperformedonhumansperm interphasenucleususingcentromericprobesforchromo— someX andY．Results：Itwasseen underthefluorescencemicroscope thatthe sperm showed withonegreenhybridization signalon theheadwasX chromosomalsperm ，whilewithonered hybridizationsignalwasY chromosomalsperm 。andthosewith2or 2fluorescencehybridiza— tionsignalsonthesperm headwereabnormalcountsforchromosomalsperm．Conclusion：The hybridization signalsarevisibleanddistinguishable，andthismethodiseffective．Itcouldbeused foranalyzinganeupoidyofhuman sperm chromosome． KeyW ords Fluorescenceinsitu H 6r n 0 ；HumanSperm Chromosome；Aneupoidy 减数分裂使染色体数 目只有体细胞的一半，受 事实也如此 ，在人类受