碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究65644.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%$ !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究 唐雪明 王正祥 邵蔚蓝 刘吉泉 方慧英 诸葛健 （江南大学教育部工业生物技术重点实验室，无锡 $!4%5# ） 摘 要 在 发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株 高产碱性蛋白酶的条件进行了研究，通过提高通气量 1D EF%3! 和改变搅拌转速， 可在发酵 内达到产酶高峰，酶活力最高可达 。利用快速蛋白液相层析 EF%3! 4% $44% ?G-D （ ）技术，建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、 脱色及聚乙二醇浓缩 6FDH I9J90J01% 得粗酶，再经过 、 柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶，酶纯度提高了 HK0L,M7N,80H01% L,M7N,80O031 3# ) $ 倍。 显示重组碱性蛋白酶分子量为 。酶学性质研究表明，酶的最适作用 为 ，最适作用温度 LIL P FJO9 $ QI MR !! $ T $ T $ T T 为 ，具有良好的 稳定性和热稳定性。 、 对酶的稳定性有促进作用， 、 、 和 能强烈 #%S MR H7 K@ R@ J@ FK6L I6F 抑制酶的活力。LIL 和U/,7 对酶的活力无影响。 关键词 碱性蛋白酶，基因工程菌EF%3!，发酵条件，重组酶的纯化及性质 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） V!4 J !%%%05%#! $%%$ %#0%3$W0%# 与普通微生物一样，基因重组菌的发酵生产水 蛋白酶的芽孢杆菌进行发酵条件的研究，对重组碱 平不但和菌种的遗传特性有关，也和发酵工艺控制 性蛋白酶工程菌进行发酵条件的的研究还很少。本 以及发酵罐的性能有着密切的关系。合理的发酵工 实验即是在1D 发酵罐上对所构建的碱性蛋白酶整 艺控制可以给微生物提供良好的环境，提高细胞水 合型基因工程菌产酶发酵条件进行了研究，探讨了 平的调控，提高目标产品的生产水平。 相关工艺