利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数_杨立桃.pdfVIP

第一届ICMSF ) 中国国际食品安全会议论文选登 PCR 1, 3 2 1 4 4 1 杨立桃 赵志辉 丁嘉羽 张承妹 贾军伟 张大兵 ( 1. 上海交通大学生命科学技术学院, 上海 200240; 2. 南京农业大学动物医学院, 江苏 南京 210095; 3. 南京大学生命科学学院, 江苏 南京 210093; 4. 上海市农业科学院生物技术研究中心, 上海市农业遗传育种重 实验室, 上海 201106) : 为分析转基因水稻外源基因拷贝数, 利 新型灵敏高通量的实时荧光定量PCR 方法进 行转基因水稻外源基因拷贝数的分析转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因( GUS 和H PT 基因) 和水稻内标准SPS 基因含量的比较计算获得定量分析了 14 株T 代的转基因水稻 0 植株, 得到了外源基因插入分别为123 和4 的转基因植株, 同时利 Southern Blot 方法进行验证 分析随机选择1 个已经过定量PCR 检测分析的转基因水稻植株, Southern Blot 的方法分析转 基因水稻植株中的H PT 或G US 基因的拷贝数, Southern Blot 分析结果显示有 15 个转基因水稻植株 的分析结果与定量PCR 分析的结果是一致的, 3 个植株定量PCR 分析的转基因拷贝数稍高于 Southern Blot 的分析结果, 主要原因是Southern Blot 方法在同一 个插入位点有多拷贝的T- DNA 片 段插入时, 转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA 片段, 电泳分析时很难分辨清楚 定量PCR 方法则完全避免了这种情况的发生, 除非目的基因DNA 片段在PCR 引物处发生断裂 两种方法分析结果的比较显示定量PCR 方法分析转基因拷贝数更加有效适 : 植物, 转基因; 稻( 米) ; 聚合酶链反应; 基因剂量 Estimating copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR YANG L-i tao, ZHAO Zh-i hui, DING Jia-yu, ZHANG Cheng-mei, JIA Jun-wei, ZHANG Da-bing ( School of life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China) Abstract: In transgenic plants, the transgene copy number can greatly influence the expression level and genetic stability of the target gene. Estimation of transgene copy number is an important part of genetically modified (GM) crop research. Currently, transgene copy numbers are estimated by Southern analysis, which i