鸭IFN-γmRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立.pdfVIP

维普资讯 动物医学进展 ，2008，29(5)：17—20 ProgressinVeterinaryM edicine 鸭 IFN一 mRNA实时荧光定量 RT—PCR方法的建立 谢 秀兰 。，汤 承 ，杨发龙 ，岳 华 (1．西南民族大学生命科学与技术学院。四川成都 610041；2．川北医学院微生物与免疫学教研室，四川南充 637000) 摘 要：为建立检测鸭IFN一mRNA表达的实时荧光定量RT—PCR方法，根据OenBank中鸭IFN一基 因序列，在保守区域设计并合成一对 引物 ，采用SYBRGreenI染料 ，建立检测鸭 IFN一 mRNA的实时荧光 定量 RT-PCR方法 (real—timeRT—PCR)。试验 以PCR产物为标准品，建立标准 曲线，随后进行熔解曲线分 析和稳定性研究。结果Ct值线性范围为 12．O～33．0，相关系数为0．997；熔解 曲线显示产物为单特异峰， Tm为 82．5±O℃；组内变异系数 (CV )为4．26 ；纽间试验无显著差异 (P0．05)。建立的检测鸭 IFN一 mRNA的Real—timeRT—PCR方法具有检测范围广、扩增效率高、特异性好、重复性和稳定性 良好等特点。 关键词 ：鸭； 干扰素；实时荧光定量 RT—PCR；SYBRGreenI 中图分类号 ：$852．4；$858．32 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5O38(2OO8)O5一O017一O4 干扰素 (interferon，IFN)具有广谱抗病毒、抗肿 型和 Ⅱ型，IFN一 属于 Ⅱ型 IFN，由T淋巴细胞和 瘤和强大的免疫调节作用，是 目前临床医学、肿瘤学 NK细胞产生 。IFN一在机体的免疫应答过程中起 和免疫学等领域的研究热点之一[扪。IFN分为 工 着重要 的作用 ，与疾病 的发生 、发展有着密切 的关 收稿 日期 ：2008-01-07 作者简介：谢秀兰(198O一)，女(回族)，宁夏银川人，助教 。硕士，主要从事禽病病原分子生物学研究。*通讯作者 [8] 裒鸿昌，张绍基．湖滩地区血吸虫病流行因素与优化控制策略 231—237． 的研究[刀．中国吸虫病防治杂志，1995，7(4)：193—201． [1O] AhdallahiOM，Bensalem H，AugierR，eta1．Arginaseex— [9] Kassim O O，DeanD A，MangoldB L，eta1．Combinedmicro— pression inperitonealmacrophagesand increaseincirculating autographicand histopathologicanalysisofthefateofchal— polyaminelevelsin mice infected with Schistosoma mansoni lengeSchistosoma rnanson~schistosomula in m ice immunized [J]．CellMolLifeSci，2003，58：1350—1357． withirradiatedcercariae[J]．AmJTropMedHyg，2002，47： Investigation on W ildRatsNaturallyInfectedwith Schistosomajaponicum inJingzhouAreaofHubeiProvince DINGXu-jia，ZHAO Hong—mei，ZHAO Shao—yang (CollegeofAnimalScience，Yangtze iversity，Jingzhou，Hubei，434025，China) Abstract：InordertOunderstandtheinfectioussituationofvoleswhich