影响胡萝卜体细胞胚诱导与发育因素的研究.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2014，21(4)：297～301 297 影响胡萝 卜体细胞胚诱导与发育因素的研究 汪 洪 。，蔡进章 ，夏鸿亮。，李校垄 ，杨树林 (1．南京理工大学环境与生物工程学院，江苏 南京 210094；2．温州医科大学附属 第二医院，浙江 温州 325035；3．温州医科大学药学院，浙江 温州 325035) 摘 要 为了建立胡萝 卜体细胞胚快速、大量诱导及发育的条件体系，以七寸人参胡萝 卜为材料，采用组织 培养方法 ，研究了不同外植体、激素、光照、愈伤组织传代时间及酵母对胡萝 卜体细胞胚诱导和发育的影响。结果 表明：激素2，4-D和KT有利于胡萝 卜胚性愈伤组织的诱导，但却抑制了体细胞胚的发生和发育；酵母能显著地提 高体细胞胚的诱导频率，促进体细胞胚的同步化发育，并减少畸形胚的产生；光照对体细胞胚的诱导频率无显著 影响；子叶和下胚轴来源的愈伤组织对体细胞胚的诱导频率没有明显的差异，但在体细胞胚的数量和发育方式上 略有差别。愈伤组织的继代时间显著地影响了体细胞胚的诱导。胡萝 卜体细胞胚的发生发育受多因素的影响。 关键词 胡萝 卜；愈伤组织；体细胞胚；发育；激素；酵母 中图分类号 S631．2 文献标志码 A 文章编号 1005—8915(2014)04．0297—05 胡萝 卜(DaucuscarotaL)为伞形科2年生草本植物， 酵母 。 贮藏根营养丰富，是人们常食蔬菜之一 ，在全世界广泛栽 1．2 方法 培。胡萝 卜的贮藏根具有发达的韧皮部，适合表达外源蛋 1．2．1 愈伤组织的诱导与培养 搓去胡萝 卜种子种毛，室 白，尤其是近年来作为表达可食疫苗中较为理想的一种模 温下用 自来水浸泡种子过夜 ，70％的酒精消毒 2min，无菌 式植物。影响胡萝 卜体细胞胚的诱导因素较多，受基因型 水冲洗 5遍后 ，用 10％的次氯酸钠溶液浸泡 15min，无菌水 的影响，体细胞胚诱导条件也不同，因此，本文就七寸人参 冲洗5遍，接种于无菌苗诱导培养基上，于黑暗、(25±1)oC 胡萝 卜体细胞胚的诱导与发育的影响因素进行了研究，建 条件下诱导无菌苗。待无菌苗萌发6～7d后转入 16h／d 立了胡萝 卜体细胞胚高频诱导条件体系，为胡萝 卜的细胞 光照条件下培养 2d，将幼苗的下胚轴和子叶切成0．4am 组织工程及后期利用胡萝 I-作为生物反应器表达外源蛋白 左右的小段 ，接种在愈伤组织诱导培养基上，(25±1)℃、暗 奠定了基础。 培养诱导愈伤组织。各愈伤组织每2周继代培养 1次。 1．2．2 体细胞胚 的诱导 愈伤组织分别在 继代 3次 1 材料和方法 (6W)和继代 12次(24W)后均接种在体细胞胚诱导培养 1．1 材料 基上诱导体细胞胚。体胚诱导条件为全 暗或 16h／d光 1．1．1 植物材料 七寸人参胡萝 卜种子，购 自杭州金科园 照 ，(25-4-1)oC，每一处理接种20个愈伤组织块，重复3次， 艺种苗技术服务部。 3w后统计其体细胞胚的诱导频率(诱导频率=诱导出体细 1．1．2 主要试剂、仪器 MS基本培养基 (Phytotechlab)；各 胞胚的愈伤组织块数量／接种总愈伤组织块数量 ×100％)。 种激素(Sigma)；酵母提取物 (富春牌浓缩酵母浸出粉)：智 2 结果与分析 能光照培养箱(宁波海曙赛福实验仪器厂，PGX一350B)。 1．1．3 培养基 无菌苗诱导培养基：MS基本培养基；愈伤 2．