谷氨酸生产菌S9114中的谷氨酸脱氢酶的研究.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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谷氨酸生产菌S9114中的谷氨酸脱氢酶的研究.pdf

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卷期生物工程学报 ! # ’() * ! +( *# 年月 $%% !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +(,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 谷氨酸生产菌!##$ 中的谷氨酸脱氢酶的研究， ! $ ! ! ! ! 王燕宋香杨平平段作营毛忠贵 ! （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，无锡 $!3%# ） $ （山东轻工业学院食品工程系，济南 $2%!%% ）摘要谷氨酸脱氢酶（）是谷氨酸生物合成的关键酶，谷氨酸棒杆菌是目前我国味精工业应用最广泛的 ABC D !!3 生产菌种，其谷氨酸脱氢酶的研究尚未见报道。分离纯化该菌中的谷氨酸脱氢酶，研究其辅酶组成，对揭示谷氨酸脱氢酶的分子结构和性质，提高谷氨酸产率很有必要。将培养至对数期中期的细胞离心收集并用含适量、 B55 :B1 的缓冲液（）洗涤，用破碎，离心去除菌体碎片得无细胞抽提液。然后使 5E 50;F1CG) ?C 6 H2 70-I@J ?0-FFK0- @-)) ?0-FF 用快速纯化系统经纤维素柱、疏水柱（）、凝胶过滤柱层析得到纯化大约倍的以 LM5E1!%% B:E:1 CNG A1$%% 6% +EB1 为辅酶的和部分纯化的以辅酶的。这两个酶分别对、高度专一，不能相互代替。 OC ABC +EBC ABC +EBOC +EBC 经COPG 和DBD1OEA: 测得前一种酶的分子量和亚基分子量分别为 !44QB 和$QB，表明该酶为具有相同亚基的六聚体。酶活性测定使用分光光度计利用（）在氧化的初速度进行。蛋白质含量测定 CN5EGCN R1%%% +EB O C 3%I. 利用方法进行，并以牛血清白蛋白为标准蛋白。纯化结果表明中确实存在两种，其中以为 S08TU(0T D ABC +EBC !!3 辅酶的尚未