细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响.pdfVIP

中国药物与临床2011年7月第 11卷第7期ChineseRemedies＆Clinics．July2011,Vo1．11,No．7 · 745 · 著 · 细胞骨架中间纤维破坏对体外 软骨细胞代谢功能的影响 王 磊 郭 恒 段王平 卫小春 【摘 要】 目的 探讨破坏中间纤维对体外软骨细胞代谢功能的影响。方法 2个月龄新西兰大白兔双膝 关节全层软骨消化为原代软骨细胞，培养 3d贴壁后，分为对照组和实验组，对照组用原代培养基继续培养 ，实验 组在原代培养基中加入中间纤维破坏剂丙烯酰胺 (终浓度为2．5mmol／L)。加药后第 1、2天利用磷脂酰丝氨酸外 翻分析法检测细胞早期凋亡率，第6天用细胞爬片苏木素一伊红(HE)染色观察细胞形态的改变，第3、6、9天用实 时定量聚合酶链反应法测定软骨细胞 Ⅱ型胶原、糖胺多糖以及基质金属蛋白酶(MMP)一l3mRNA的表达量。结果 实验组在加药后第2天软骨细胞的早期凋亡率高于对照组(P0．05)；和对照组相比较，实验组在加药后第6天 HE染色观察到细胞形态不规则 ，呈多角形，胞核深染且分裂像增多，细胞基质减少；在加药后第 3、6、9天检测到 实验组 Ⅱ型胶原和糖胺多糖的mRNA表达相对于对照组下降(氏0．05)；在加药后第 6、9天 MMP一13mRNA表达 显著增加(P0．01)。结论 中间纤维破坏后可以诱导软骨细胞的早期凋亡，致 Ⅱ型胶原和糖胺多糖产生减少 ，而 炎性因子MMP一13表达增多，可能是骨关节炎产生的一个重要环节。 【关键词】 软骨细胞；胶原 Ⅱ型；基质金属蛋白酶类；细胞骨架 Theeffectofintermediatefilamentdestructionincytoskeleton onmetabolicfunctionsofchondrocytesin vitro WANGLei,GUOHeng,DUANWang-ping,WEIXiao-chun．DepartmentofOrthopaedics．theSecondHospitalof ShanxiMedicalUniversity,Taiyuna 030001，China A【bstract】Objective Toinvestigatetheeffectofintermediatefilamentdestructiononmetabolicfunctionsof chondrocytesinvitro．M ethods Five2-montholdNew Zealandwhiterabbitswereharvestedforfull-thicknesscarti— lagesofdoublekneejointundersterileconditions．Thefull—thicknesscartilageswerethendigestedintoprimarychon— drocytesinsequencebyusing0-4％ pronaseand0．025％ type lIcollagenandcultivatedfor3days．Afteradhesion． chondrocytesweredivided intocontroland experimentalgroupsand successivelyculturedbyusingprimary medium (90％DMEM／F12+IO％fetalcalfseurm)，withtheexperimentalgroupadditionallyaddedintermediatefilamentdestruc- tiveagent-acrylamide(finalconcentration：2．5mmol／L)．TheearlyapoptosisratewasdetectedbyannexinVat1and2 day