第35章 DNA的重组与基因工程.pptVIP

* * Chapter35 DNA的重组与基因工程 基因重组与基因工程 ？ Genetic recombination Chapter35 DNA的重组与基因工程 一、DNA的重组的分类 同源重组、特异位点重组和转座重组等类型 二、自然界的基因转移和重组 自然界的基因转移和重组是无目的 基因工程有目的 基因重组(genetic recombination)——整段DNA在细胞内或细胞间,甚至不同物种间进行交换,并能在新的位置上复制,转录和翻译。 Chapter35 DNA的重组与基因工程 二、自然界的基因转移和重组 1、结合作用 结合作用——质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一个细胞（细菌） 2、转化及转导作用 （1）转化作用 transformation 通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型的过程 （2）转导作用 transduction 病毒、噬菌体介导 溶菌途径 溶原菌途径 3、转 座 （2）转导作用 transduction 病毒、噬菌体介导 溶菌途径 溶原菌途径 2、转化及转导作用 3、转 座 转 座 反向重复序列 由可移动的DNA序列（插入序列和转座子）介导的基因移位或重排 ①插入序列转座 保守性转座 复制性转座 反向重复序列 　　 转座酶 ②转座子转座 转座子—可以从一个染色体位点转移至另一位点的分散的重复序列 Chapter35 DNA的重组与基因工程 二、自然界的基因转移和重组 4、基因重组 不同DNA 分子间发生的共价连接称重组 （一）位点特异的重组 特异位点 （二）同源重组 同源序列间的重组 Chapter35 DNA的重组与基因工程 三、重组DNA技术 1973 Cohen第一例成功的克隆实验 1978 Genentech公司 人胰岛素 世界上第一种基因工程蛋白药物 1982 第一个基因工程药物--重组人胰岛素在英、美获准使用 1985 第一批转基因家畜（兔、猪和羊），中国 转基因鱼 1993 基因工程西红柿在美国上市 1997 英国罗斯林研究所 多莉羊 1999.9 中国获准加入人类基因组计划.负责测定人类基因组全部序列的1% 2000.6.26 科学家公布人类基因组工作草图 2001.2.11 公布人类基因组基本信息 生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程 Chapter35 DNA的重组与基因工程 三、重组DNA技术 胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 Chapter35 DNA的重组与基因工程 三、重组DNA技术 （一）重组DNA技术的相关概念 1、DNA克隆 克隆（clone） 无性繁殖 分子克隆(DNA克隆)—应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子拷贝，或其表达产物。 基因克隆、DNA重组、 基因工程 (genetic engineering) 基因克隆示意图 2、工具酶 常用的工具酶 切除末端磷酸基 碱性磷酸酶 3′末端多聚尾 末端转移酶 5′磷酸化、探针标记 多聚核苷酸激酶 cDNA合成 反转录酶 探针标记、补平3′末端 DNA聚合酶Ⅰ 生成3′- 5′磷酸二酯键 DNA连接酶 切割DNA 限制性核酸内切酶 （一）重组DNA技术的相关概念 限制性核酸内切酶 细菌限制修饰体系 限制性核酸内切酶 甲基化酶 识别特异的位点—酶切位点 回文结构 4～6 bp 出现两种末端 粘性末端 粘端 平头末端 平端 配伍末端 （一）重组DNA技术的相关概念 目的基因（外源基因） cDNA 逆转录 基因组DNA 基因工程的目的 目的基因拷贝 克隆载体 基因表达产物 表达载体 3、目的基因 target DNA （一）重组DNA技术的相关概念 自我复制 克隆载体、表达载体 原核载体：质粒(pBR322,pUC…）噬菌体（λ，M13） 真核载体：动物病毒载体pLXSN 质粒—存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子 理想的质粒 1.拷贝数多; 2.两三个抗药性基因 terr am