奈瑟氏淋球菌表面蛋白A基因克隆及在真核细胞中的表达研究.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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奈瑟氏淋球菌表面蛋白A基因克隆及在真核细胞中的表达研究.pdf

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卷期 !! 微生物学报 %’ (!! 0 ( 年月 #$$! # !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,-.,/ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 奈瑟氏淋球菌表面蛋白基因克隆及 ! 在真核细胞中的表达研究季明春陈红菊（扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室扬州 ##4$$）摘要：为了研制奈瑟氏淋球菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白（，）的核酸疫苗，根据淋 E !#$$%# F-,G.?* H,I*D E 0FJE 球菌!$’( 的基因序列，设计一对寡核苷酸引物。以淋球菌KLM5E 菌株基因组N0E 为模板，通过HOP 扩增获得具有完整开放读码框架（）的基因，并将其正向插入真核表达载体，成功构建了表达基因的 MP) !$’( JOQ%F?,JI !$’( 真核细胞表达载体J?0FJE。用脂质体包裹J?0FJE 重组质粒转染OMR 细胞，以间接免疫荧光分析法分析 !$’( 基因的表达，发现转染J?0FJE 的OMR 细胞能高表达 !$’( 抗原。淋球菌免疫保护性抗原 !$’( 基因的克隆与真核细胞表达，为进一步研究淋球菌0FJE 对雌激素处理的淋球菌感染实验小鼠的免疫保护作用奠定了基础。关键词：奈瑟氏淋球菌，表面蛋白E，克隆，表达中图分类号：文献标识码：文章编号：（） S3;; E $$$58#$3 #$$! $5$$!5$; 奈瑟氏淋球菌在漫长的进化过程中已经形成一套逃避，引物： OE6ZEEEEEEZOEO66ZOO5;\ # 4\5ZZZO6OZEZ65 人体免疫系统作用的机制，从而严重地限制了淋病疫苗的研 OEZEE666ZEOZOZOEOZOOZ5;\。按文献方法进行 HOP 扩［］［］究。通过对淋球菌、、和等外膜抗原的研增# ，反应结束后，取产物作琼脂糖凝胶电泳，观察电 H, H’ MJ. TMR HOP 究，人们发现大多数淋球菌外膜抗原都具有非常大的抗原变泳条带的大小。异性。但是，为了研制有效的淋球菌疫苗，人们一直没有放 #) 真核重组质粒的构建和酶切鉴定弃寻找具有免疫保护性的淋球菌保守抗原。H’.DI* 等首先克按JOQ%F?,JI 克隆试剂盒操作说明书要求，取 )*,. 、隆了淋球菌的奈瑟氏