头孢克洛片的微生物限度方法学研究.pdfVIP

E医药2009年11月 筮 鲞 筮丝 ! 丛 婴 ： ： !三 ：丝 3l51 同的提取方法提取效率也不同。最近研究发现玻璃珠振荡法 值，浓度和纯度可以满足实验检测的需要，整个提取过程4～5 效率最高而且耗时最短，提取的DNA绝对拷贝数和最小变异 h，不需特殊仪器，简便易行，为曲霉菌的分子生物学研究提供 指标最好的优点，可以满足实验的要求 。 了一种适合于 PCR反应的DNA提取方法。 我们在参考和使用不同提取方法的基础上，主要从以下两 参考文献 1 P．Mu?OZ，GuineaJ，BouzaE．Updateoninvasiveasp~rsillosis：clinical 个方面进行了改进 ：(1)尽可能简化操作步骤；(2)提高所得 anddiagnosticaspects．ClinMicrobiolInfect．2OO6(suppl7)：24-39． DNA样品的质量。提取中将玻璃珠放入菌丝液中，置涡漩混合 2 FredrieksDN，SmithC，MeierA．ComparisonofsixDNAextractionmeth— 器上充分混匀 ，是获得高DNA收率的关键步骤。在最后的乙 odsforrecoveryoffung8lDNA 8sassessedbyquantitativePCR．JClin 醇沉淀时，以玻璃棒挑取代替离心沉淀，会获得分子量太于 Microbiol。2005．43：5122—5128． (收稿 日期：2009一o6—23) 50kb的DNA样品，在核酸蛋 白分析仪 (DU640)上测定吸光度 · 药 物研 究 与 分 析 · 头孢克洛片的微生物限度方法学研究 王荣端 高玉清 纪敬娟 【关键词】 头孢克洛片；微生物限度检查；薄膜过滤法；常规法 【中图分类号】 R917 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002-7386(2009)22—3151—02 头孢克洛片为头孢菌素类广谱抗菌药，通过与敏感菌细胞 菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌肉汤培养物 1ml，分别加0．9％ 壁上的特异蛋白结合，从而抑制转肽酶的生物活性，使细胞壁 无菌氯化钠溶液9ml，按 l0倍稀释至50～100cfu／ml的菌悬 黏肽的合成减少，甚至消失，从而使敏感菌的细胞壁缺损，菌体 液，混匀备用。取经25℃培养24—48h的白色念珠菌真菌培 膨胀溶解。由于该药物本身具有较强的抑菌作用，用常规方法 养物 1ml，同上用0．9％无菌氯化钠溶液 l0倍稀释至5O一100 进行微生物限度检查不能消除其抑菌活性。根据2005年版 cfu／mr的菌悬液，混匀备用。取经25~C培养7d的黑曲霉真菌 《中国药典》 微生物限度检查方法学验证的要求，对其检验 斜面培养物，加入0．9％氯化钠溶液6ml将孢子洗脱，吸出转 方法进行验证，建立一种可行 、准确、有效的检验方法，消除供 移至空试管作为原液 ，用 0．9％无菌氯化钠溶液稀释至50～ 试品中药品成分对微生物的抗菌和抑菌作用，提高药品本身污 100cfu／ml的菌悬液 ，混匀备用。 染微生物的检出率。 1．3．2 供试液制备：取供试品10g，加入 pH值为7．0的无菌 1 材料与方法 氯化钠蛋白胨缓冲液 1