瘦素在人骨关节炎中的作用.pdf

◇：!：，。匕麓! 瘦素在人骨关节炎中的作用 中文摘要 瘦素在人骨关节炎中的作用与机制 中山大学孙逸仙纪念医院骨外科 学位申请人：李德 导师：宋卫东副教授 中文摘要 研究背景 病理特征为关节软骨的破坏和骨赘形成。OA在世界各地广泛分布，无明显种族 和地域差异，且发病率高，在63．70岁的人群中，出现影像学上膝关节OA的比 例约为27％；而在80岁以上人群中，可增加至44％。OA已经成为我们所面临 的严峻问题。 首先引起研究者关注的是肥胖的生物力学作用对OA的影响，当一个人在行 走的过程中，通过膝关节的重量大约为体重的3-6倍，因此，肥胖者的体重不仅 加重了承重关节的负荷，也增加了OA的发病风险。关节负荷在OA发病过程中 起到了一定的作用，然而，这却难以解释非承重关节(如手关节)的OA表现。 重指数密切相关，这意味着瘦素等代谢因素可能在OA的发病中起重要作用。 瘦素主要是由脂肪细胞分泌的循环激素，由ob基因编码的一种分泌型蛋白 质，具有调节体重、神经内分泌、生育、免疫炎症反应与血管生成等。此外，瘦 素在炎症反应中具有双重作用，一方面，它激活单核细胞／巨噬细胞，使其产生 TNF．a、IL等炎性细胞因子，诱导T细胞分化为Thl细胞，表达干扰素；另一 方面，它能够刺激IL．1受体拮抗剂等抗炎因子的释放。 为了了解瘦素在OA中的作用及可能机制，本研究进一步比较我国健康人群 及OA患者的血清、滑液瘦素水平与西方国家的差异，观察瘦素在软骨细胞增殖 ◇!．奠。荛! 瘦素在人骨关节炎中的作用 中文摘要 和分泌功能中的作用，以期为阐明瘦素在国人OA中的发病机制提供新的思路， 为治疗OA提供实验依据。 二目的 观测瘦素在中国健康人群及OA患者血清、关节液中的分布情况与西方国家 是否有差异性，观察瘦素对软骨细胞的增殖及分泌功能的影响，初步推测瘦素可 能与OA软骨退变及骨赘形成相关。 三方法 1、选择了60例原发性膝关节OA患者作为实验组，27例健康人作为对照 组。受试者禁食8h小时，清晨空腹抽取肘静脉血4ml，置于非抗凝试管内，37C 0min，留上清；另外，严格无菌操作，抽取膝 水浴40min，3000rmp·rain-1离心1 留上清；将上清分装于无菌EP管中，封口，置于．70C冰箱冻存备用，避免反复 linkedimmunosorbent 冻融。采用ELISA法(enzyme assay，酶联免疫吸附法)测 定瘦素、TNF．a的水平，按ELISA试剂盒说明书操作。 2、取正常人及OA患者的软骨、骨赘、滑膜标本，以10％福尔马林固定、 石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察其病理改变，同时作瘦素、瘦素受体的免 疫组织化学染色，观察它们在软骨组织中的表达水平。 3、取正常人及OA患者软骨标本，分离培养软骨细胞，传代并鉴定，然后 加入0，10，50，100，500，1000ng·mL-1不同浓度的瘦素进行培养，通过MTT法测 定第l、3、5天的软骨细胞的增殖情况；并运用RT-PCR方法检测不同浓度的瘦 素对软骨细胞的II型胶原、TNF，a、TGF—p1mRNA表达水平的影响。 4、所有数据均采用SPSSl3．0软件统计包进行分析，连续性正态分布的资料 以(i士s)表示，两组均数间比较采用T Test，多组均数间比较采用One．Way Anova，两组均数相关性分析采用简单线性相关，P0．05为差异有统计学意义。 四结果 l、OA患者的血清瘦素水平高于正常人群，且OA患者关节液瘦素水平明显 U ◇：!：，皇蕊! 瘦素在人骨关节炎中的作用 中文摘要 高于其血清(PO．05)；此外，轻、中、重度三组OA患者的关节液瘦素