酚／氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2009，37(34)：16771—16772 责任编辑 陈娟 责任校对 傅真治 酚 ／氯仿抽提法提取绵羊凝血块 中基 因组 DNA 曹果清 ，莫清珊 ，陈凤仙 (1．山西农业大学动物科技学院，山西太谷o308ol；2．天津实发冠华生物科技有限公司，天津30o462) 摘要 [目的]对组织DNA提取方法进行改进 ，建立一种从绵羊凝血块 中提取基 因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪 碎，用组织DNA抽提液裂解细胞，用蛋 白酶K消化后，经过酚／氯仿抽提 ，无水乙醇沉淀获得基 因组DNA。[结果]提取的DNA浓度为 (159．90±0．70)ng／ ，A ／A8o比值为 1．80±0．01，分子完整，结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板，对绵羊BM203微卫星位点 进行了PCR扩增，扩增效果良好。[结论]该方法简单、实用，提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求，值得推广借鉴。 关键词 绵羊凝血块；酚／氯仿抽提法；DNA提取 中图分类号 Q52 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2009)34—16771—02 GenomicDNA IsolationbyPhenol／ChloroforillExtractingM ethodfrom SlIeepBloodClot CAOGuo-qingetal (CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu，Shanxi030801) Abstract l0biectiveIThestudyaimedtoestablishthemethodofextractinggenomieDNAfromsheepbloodclotonthebasisoftheimprove． mentofmethodforextractinggenomicDNAfromtissues．[Method]ThgenomicDNAwithcompleteprimarystructureandhighpuritywas obtainedrfom thesheepbloodclotafterthestepsofcuttingthesheepbloodclotwithophthalmicscissors．celllysiswithtissueDNA extracts anddigestedbyproteinaseK，extractingwithphenol／chloroformandprecipitatingwithethanolwereperformed．[Result]T}leconcentrationof theextractedDNAwas(159．90±0．70)ng／landtheratiooftheA260／A280was1．80±0．O1．ThesheepmicrosatellitelocusofBM203was amplifiedbyusingtheextractedDNArfomthesheepbloodclotastemplateofPCR，andthePCRresultwasperfect． 『Conclusion]Thismeth。 odissimpleandfeasible．thequantityandqualityoftheextractedDNA cansatisfythedemandsofrthesubsequentresearches．Itisworthto extendingandusingofrreference． Keywords Sheepbloodclot：Phenol／chloroforillextractingmethod：DNA extraction DNA提取是分子生物学研究中的一个关键环节，外周血 mg，置于1．5ml离心管中，用消毒后的眼科剪将其剪碎。加 是常用于 DNA提取的试验材料。通常在采集用于提取 DNA 入 600IxlSTE[0．1moL／LNaC1，10mmol／LTfis·HC1(pH值 的血液样品时，需要加入 EDTA、ACD等抗凝剂，以免血液凝 8．0)，1mmol／LEDTA(pH值 8．0)]，10 蛋 白酶 K(20 集形成凝血块而影响DNA的提取质量。但即使加入抗凝 mg／m