色谱+仪器分析简介.docVIP

1、简述光电二极管阵列检测器在高效液相色谱中的应用 1）色谱峰的纯度检查 2）色谱峰的鉴定 3）谱带宽度检测 4）峰抑制 5）选择最佳波长 2、简述如何采用二极管阵列检测器检查色谱峰的纯度 1）比较光谱法：对于纯物质峰来说，在色谱峰范围内任何洗脱时间处所取的光谱图应该是一直的，对于非纯物质峰来说，在色谱峰的不同部位得到的吸收光谱中，吸收最大值发生了位移。 2）吸收比法：对于纯物质，两个特定波长处的吸收比为常数，与浓度无关 3）双波长法：记录被测组分在两个等吸收波长处的吸收值差对时间色谱法，纯物质峰应该得到一个零信号，否则证明峰有杂志存在。 3、试述影响色谱峰展宽的柱内柱外因素 答：柱内因素 速率理论 1）涡流扩散项 和填料的均匀程度有关 填充颗粒越小，越均匀峰展宽越小。 2）纵向扩散项 试样分子在色谱柱内被流动相带向前时，由分子本身运动引起的扩散会引起峰展宽。流速下降，纵向扩散项增加，理论塔板高度增加，峰展宽。 3）传质阻力项 流速越快 阻力越大 峰展宽。 柱外因素 1）尽量减少连线管线的长度，并采用细内径的管线为连接线。 2）采用死体积小的检测器。 3）避免溶剂效应。进样时，使溶解待测物的溶剂为流动相或洗脱能力比流动相小的弱溶剂。 4）采用合适的进样方式和技术 进样体积越大，柱外效应越大。 4、试述制备气相色谱法填充柱的一般流程和注意事项 1）固定液的涂布：要选择合适的溶剂，选择固定液与担体的配比，选择担体的粒度越细柱效越高 2）柱管预处理：不锈钢管耐用，但不适用对金属离子不稳定药物的分析，玻璃管易碎，但无金属离子的催化活性 3）色谱柱填充及老化：一般多用抽气减压法填充色谱柱，新充好的色谱柱需老化后才能使用 5、何谓衍生化技术？其在气象色谱分析中有何应用特点以及三种常见衍生化反应？ 定义：衍生化技术是药物分析中常用的一种分析手段，是将药物先进行结构改造，再进行色谱分析的方法，称之为衍生化技术。 目的（应用特点）： 1）使原来不挥发或挥发差的被测组分转变成具有一定挥发性的化合物，降低沸点以适应气相色谱分离的要求 2）降低被测组分的极性，减小或消除拖尾和吸附现象 3）改变样品中被测组分或干扰组分的理化性质，以改进分离特性 4）产生特殊性质，使待测组分在特定检测器上具备或提高检测特性，以达到痕量分析的目的。 5）在与其他一起连用技术中，利用各类衍生化反应能获得更明确或特定的结构信息。 常用反应种类： 1）硅烷化反应 2）酯化反应 3）酰化反应 4）卤代衍生化法 6、试述气相色谱仪使用时的一般流程及注意事项 流程： 1）打开气相色谱仪电源开关，待自检完毕显示正常后，打开气相色谱工作站 2）打开载气的气源阀门，控制载气流速 3）在工作站或仪器中输入分析参数 4）检查参数无误后，运行仪器 5）各项参数达到预设值后，分析样品 6）实验结束后，先关加热装置，降温后关载气 7）最后关闭仪器电源，工作站 注意事项： 1）开机前检查是否漏气 2）用微量注射器取试样要洗涤，如有气泡则针头朝上排气泡 3）关闭气源时，先关减压阀，后关钢瓶阀门 4）开启热导检测器前必须通载气，试验结束先关电源后关载气 5）保持每次进样的平行性 6）进样前，通载气再升温，结束后，降温后再关载气 7）通常柱温比固定液最高稳定低30°，检测器温度至少比柱温高30°，气化室温度通常与检测器温度相同。 HPLC仪的基本操作步骤： 1）操作前的准备工作 2）开启稳压电源后，依次打开输液泵、柱温箱、检测器和色谱处理机电源 3）在输液泵及检测器上设定所需要的流速、检测波长等参数 4）排除管路气泡或冲洗管路 5）按pump键，设定输液泵以低流速泵出流动相 6）待检测器预热后，打开色谱工作站，开始走基线。基线平稳后进样。 7）进样，同时采集数据并记录 8）试验后关闭电源，卸下色谱柱。 7、色谱法的系统适用性试验通常要考察哪些因素，这些因素应如何评价或计算，标准如何？ 1）色谱柱的理论塔板数：在选定的条件下，用对照品或内标计算色谱柱的理论塔板数n。若达不到规定的理论塔板数，应改变色谱柱的某些条件，是理论塔板数达到要求。 2）分离度： 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。 规定，R应大于1.5 3）拖尾因子： 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测物峰的拖尾因子（T）是否符合该品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。T应在0.95-1.05 4）重复性： 取各种项下的对照品溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0% 8、简述反相离子对色谱的分离原理，并对影响溶质保留值的各个因素加以讨论？ 离子对色谱法：是用正相或反相色谱柱分离离子型化合物和可解离化合物的方法。 原理：反相离子对色谱法是把离子对试剂加