血清α1-抗胰蛋白酶变异体的薄层等电聚焦电泳分析.pdfVIP

第l5卷 第3期 泸 州 医 学 院 学 报 AO1．】5 No．3 1992年 IOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE 92 7?血清o一【抗胰蛋白酶变异体的 薄层等 电聚焦电泳分析 李 洪 潘新： 罗文炽 王清纯 吴民泸 陈文缘 JL．．———一 ———————一 生物化学教研宣 杞 6占 搞 曩 薄层等电聚焦电泳分析血清抗牌蛋白酶 a- 变异体．具有操作简便、分辨率高，重复 性好等优点． et-AT 的遗传缺陷与慢性阻塞性肺气肿 肝硬化等虞病的发生有关．本文报告利用薄层 等电聚焦电泳技术对泸州地区362倒^血清 a~-AT 的遗传类型进行分析的结果。发现在受检人群中， MM型纯台-Y-~i97．79和(354／3B2)，MS型杂台子占I．1o和(4／3e2)，Mz型杂台子 占o．B3和(3／3e2)， 其余0．28和(1／3Bz)为ME型杂台子．此外．作者还对薄层等电聚焦电诛技术进行改良，使分辨率进一 步提高． 关键诃 薄屠等电聚焦 ；a一毽堕蛋白酶；i!堂 分类号 R de．6 r抗胰蛋 白酶是 由肝脏合成的一种分子 0．4ml，88mmol／L ，AP0．12ml，双蒸水 量约50KD的糖蛋 白，是血浆中最重要的蛋 白 3．42ml。 酶抑制剂，它能抑制胰蛋 白酶 弹性蛋白酶等 电极液：阳极为1．0mol／L磷酸，阴极 为 多种蛋白酶的活性。用酸性淀粉凝 咬电泳和交 1．Oml／L 甘氨酸。 叉免疫 电泳等技术分析 Ⅱ．—AT ．至少已鉴定 其余试剂均参照Jeppson法 。配制。 出3O多种变异体 ．．。近年来，采用高分辨的等 血清标本：由本院附属医院提供。共362 电聚焦电泳 (IEF)方法。，发现的 Ⅱ广AT等 例，其中健康人340倒，慢性盱炎，I阡硬化2O 位基因 (Pi)变异体大大增加，丰富了Pi基因 例，原发性肝癌 2例 。 库中等位基因的数量 “ 。本文报告用薄层等 1．2 方法 电聚焦 电泳 (TLIEF)对泸州地区人群中 血 血清标本的处理 ，血清 标 本 置-20。C保 清 “—AT变异体进行初步分析的结果。 存。临用前用半胱氨酸还原处理。 凝胶 的制备：参照JePPson法 进行。凝胶 1 材料和方法 厚度为0．6mm。 ， 1．1 材料和试剂 等 电聚焦 电休 ：500V恒压预 电泳 l小时， 凝腔混台液 ：两性载体，pH3—9(上海 然后上样 (上样滤纸大小为 4×3ram)。 在 产)O．08ml，两性载体，pH4— 6(上海产 ) 800V恒压 电泳30分钟后移去上样滤 纸， 再 于 0．64ml； 3o0~_／LAcr—Bis贮 液 1．34mh 1000-1200V恒压聚焦 2小时。 360ml／L甘 油 2．0m1， 10ml／LTEMED 固定、染色和脱色；参照 JePPson法。进 l7O 行。脱色温度为40,-50。C。 至少可出现 5条区带 (由于 糖 含 量 不 同所 致)，等 电点在4．4—4．7之间，其第 2，3