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外周血DNA抽提（酚－氯仿法）
实验前准备：
融化冻存的血
调水浴锅至56℃。
操作步骤：
新鲜血液
全血离心1300g,15min(或静置)
吸上层白细胞到1.5ml离心管中
加灭菌过的纯水至1.5ml刻度，离心,4℃，4000g，15min
去上层血清，加无菌水1ml溶血
离心4℃，3500g，10min去上清，反复洗血3次。
6、加TES 720ul，RNaseA 5微升，37℃或室温静置20min（消化RNA）。
7、PK（10mg/ml）15ul,56℃消化3-4小时或过夜，直至没有肉眼可见的悬浮物。
……后续操作从冻存血液操作步骤第5步开始。
冻存血液
1．冻存血室温溶解，取1ml转移至1.5ml离心管。
2. 离心：室温，3500g，15分钟，弃上清，约残留30至50微升。
注意：冻存血融化后会溶血，离心后白细胞沉至管底，呈粘稠的团状，棕红色，与上清的颜色接近，不易分辨，吸除上清的时候动作要缓慢，注意不要吸走白细胞沉淀。
3. 加TES 635微升，RNaseA 5微升，37摄氏度或室温静置20min（消化RNA）。
4. 加PK（10mg/ml）100微升，温和地翻转8次混匀，56度温育过夜（直至没有肉眼可见的悬浮物），不时翻转混匀。
5. 加入等体积（740微升）酚,翻转10分钟混匀。
6. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相640微升。
7. 加入等体积（640微升）酚, 翻转10分钟混匀。
8. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相520微升。
9. 加入等体积（520微升）酚-氯仿-异戊醇, 翻转10分钟混匀。
10. 离心：17000g, 15分钟,吸取上层水相400微升。
11. 加入3M 乙酸钠（pH5.2） 40微升（1/10体积），加入880微升（两倍体积）-20℃预冷的无水乙醇 ,翻转20次混匀，会出现白色絮状DNA沉淀。
12. 15000g, 4 ℃ 10分钟,小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液。
13. 加70%乙醇1ml重悬沉淀，15000g, 4 ℃ 5分钟,小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液。
14. 再加70%乙醇1ml重悬沉淀，15000g, 4 ℃ 5分钟,小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液，用无菌棉签搽拭离心管内壁，勿碰到DNA沉淀。
15.打开管盖，室温静置3钟，加纯水30微升-50微升，低速Vortex或用枪吹洗5次混匀，室温静置10分钟。
15.测定浓度和A260/A280，记录，置-20℃保存。
使用此法提取-20℃冻存或4℃短期保存的全血DNA，产率≥20微克DNA/ml全血，A280/A260值大部分在1.80至1.85左右。
试剂的配制：
1. TES：
Tris-HCl: 50mM
NaCl: 100mM
EDTA: 1mM
SDS: 0.5%
pH： 8.0
2. 无Dnase的胰Rnase （100倍）:
最终使用浓度：0.1mg/ml（现加） 。
TIANGEN: RT405 100mg/ml 0.4ml 320元
AMRESCO: 100mg 435元
3. 蛋白酶K溶液的配制（100倍）：
?? 用裂解缓冲液配制浓度为10mg/ml。 或用超纯水配制成相同的浓度。最终使用浓度：0.1mg/ml。
AMRESCO(0706):100mg 260元
4. 3M NaAc pH5.2：
?? 1L: 600ml H2O中加入408.24gNaAc 3H2O , 溶解后，用冰醋酸调pH至5.2， 然 后定溶1L ，灭菌。
5. Tris饱和酚（pH8.0）、酚-氯仿-异戊醇均购自Amresco，货号分别为：0945，0883 。
成本总计：14.841元/人份 （QIAamp DNA Blood Midi Maxi 试剂盒成本大约为：170元/人份）
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