固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究.pdfVIP

第 卷第 期 色 谱 !’ ) \5/8!’G58) 年 月 $$$ % V1/$$$ ;TUG++V?AWGFB?X;TW?YFS?ZWFLT[ ] 固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及 纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究 ! ! 魏 琪 ， 姚汝华 ， 鲍时翔 （ 华南理工大学生物工程系，广东 广州 ； 中国热带农科院生物技术国家重点实验室，海南 海 口 ） !8 :!$()! 8 :%!!$! 摘要：以大孔纤维素滤纸为基质，通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化 ，装柱后制得固定 ;1 化金属螯合亲和膜色谱柱。对 ／ 粗品进行了纯化研究，将其比活从 ／ 提高到 ／ ，纯 ;1=2#?@ ():A ,B (’’A ,B 化倍数为 ，蛋白回收率为 ，活性 回收率达 。设计 了一种解决金属离子泄露 问题 的方案，将 !$C% C*D ’:D 泄露量降至 ／ 。 ;1 ’( 3B 关键词：亲和色谱；亲和膜；固定化金属螯合亲和色谱；超氧化物歧化酶 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） ?(:%8%E:: F !$$$#’%!*$$$$)#$*(!#$* 柱由中科院大连化物所惠赠，纤维素分析滤纸购 自 ! 前言 杭州新华造纸厂，超氧化物歧化酶购 自鞍山康美生 固定化金属螯合亲和色谱是一种有效的蛋白质 物制品厂，其它试剂均为国产分析纯化学试剂。 分离纯化方法，其原理是通过 ， ， ， # 实验方法 ;1 ;5 =2 等过渡金属离子与蛋 白质表面的组氨酸、色氨 ##! 亲和膜色谱柱的制备 固定化金属螯合亲 G. 酸或半胱氨酸配位结合，利用蛋 白质表面这些氨基 和膜的制备方法参见文献［ ］。将 张纤维素分 !$ *$ 酸的种类、数量、位置和空间构象的不同所导致的与 析滤纸放入 ／ 氢氧化钠溶液中，经碱处理 :,5/B *$ 金属螯合物的亲和力大小的不同，选择性地对蛋 白 后，再加入 ／ 氢氧化钠 二 甲亚砜 ,.2 $,B:,5/B