蝴蝶兰查尔酮合酶基因cDNA的克隆,鉴定及其原核表达.pdfVIP

第 43 卷 　第 2 期 ( ) Vol. 43 No. 2 复 旦 学 报 自然科学版 2004 年 4 月 Journal of Fudan University (Natural Science) Apr. 2004 　　文章编号 (2004) 蝴蝶兰查尔酮合酶基因 cD NA 的克隆、 鉴定及其原核表达 韩颖颖 , 明　凤, 王敬文 , 梁　斌 , 郭　滨 , 叶鸣明 , 沈大棱 (复旦大学 生命科学学院 遗传学研究所 ,遗传工程国家重点实验室 ,生物多样性科学研究所 , 生物多样性与生态工程教育部重点实验室 ,上海 　200433) ( ) ( ) 摘 　要 : 利用逆转录聚合酶链式反应 RTPCR 得到在蝴蝶兰花瓣中特异性表达的查尔酮合酶 cDNA pchs 1 . DNA 序列分析表明 ,该序列与已发表的查尔酮合酶基因有很高的同源性. 将此 cDNA 序列不改变阅读框架克隆 到p ET24α( + ) 原核表达载体上 ,经 IPTG 诱导后 ,SDSPA GE 的结果表明有预测大小的蛋白受诱导表达 ,该基 因在植物中的功能验证工作正在进行中. 关键词 : 蝴蝶兰 ; 查尔酮合酶 ; 反转录 PCR ; 表达 中图分类号: Q 786 　　　　文献标识码 : A 类黄酮是植物中主要的花色素 , 同时在植物的多种功能中发挥重要作用 ,如防 UV 照射1 、防真菌侵 2 3 ( ) 染 、植物的育性 等. 查尔酮合酶 Chalcone Synthase ,CHS 参与类黄酮的合成 ,催化由对羟基桂皮酰辅 酶 A 向四羟基查尔酮的转化4 ,是类黄酮合成途径的限速酶. 与其产物类黄酮的功能相适应. 查尔酮合酶 的表达受 UV 照射5 、真菌侵染等条件诱导6 ,且在花中特异性表达7 . 利用转基因共抑制的特点 ,将查 尔酮合酶反义 cDNA 转到观赏花卉中 ,可以改变植物的花色8 ,提高花卉的观赏价值和经济价值. 蝴蝶兰是一种名贵的观赏花卉 ,但其花色品种较单一. 我们利用 RTPCR 方法 ,从蝴蝶兰花瓣中克隆 得到在花瓣中特异表达的查尔酮合酶基因 ,希望能通过反义抑制或超量表达等途径改变蝴蝶兰的花色 ,从 而增加蝴蝶兰花色品种的多样性. 本研究具有一定的理论意义与应用前景. 1 　材料与方法 1 . 1 　植物材料 ( ) 蝴蝶兰 Phalaenopsis hybrida 由上海农科院蔬菜园艺所提供. 1 . 2 　菌株和载体 α 克隆宿主菌株 E . coliDH5 和原核表达宿主菌 E . coliBL21 为本实验室保存菌株 ;克隆载体 : p GEM ( ) ( ) α( ) ( ) R T 载体 PROMEGA 公司 ;原核表达载体 : PET24 + Novagen 公司 . 1 . 3 　试剂和酶制剂 RNA 提取试剂 Trizol Kit , Taq plus 和 Oligo dT 均购自上海生工生物工程技术公司 ; RTPCR 试剂盒 SuperScript TM ⅡRnase H - Rever