基因科学的革命———基因芯片技术3.pdfVIP

生理科学进展 2000 年第 31 卷第 2 期 1·35 · ·小 专 论· 基因科学的革命 ———基因芯片技术 ( ) 翟 　鹏 　童坦君 北京医科大学生物化学与分子生物学系 ,北京 100083 摘要 　基因芯片技术是一种建立在杂交测序基本理论上的全新技术 ,它利用固定在 芯片上的几万至几十万条探针与样品进行杂交 ,在一步实验中获取大量的信息。它 的出现 ,使基因序列测定、基因功能测定等工作的程序得到了极大的简化 ,使许多原 来根本不可能实现的检测成为可能。基因芯片技术使用了包括光控固相化学合成、 激光共聚焦等在内的多项先进技术 ,实验实现了全部自动化 ,操作极为简便 ,可以节 约大量的时间和实验成本。该项技术 , 已经在基因多态性分析、基因表达分析等多方 面得到了广泛的应用 ,并已开始应用于临床诊断。随着基因芯片技术的进一步成熟 和越来越多的成品芯片的设计制造成功 ,该项技术必将在整个分子生物学领域掀起 一场新的革命。 关键词 　基因芯片 ;杂交 ;光控固相化学合成 ;激光共聚焦 学科分类号 　Q75 ;Q81 核酸杂交技术无疑是用于基因研究的最常用的工具 ,应用核酸杂交技术可以对基因的同 源性以及其功能状态进行测定。但是 ,在分析复杂的基因网络 ,特别是要判明基因群的功能状 态时 ,工作量十分庞大 ,传统的核酸杂交技术的效率就显得过于低下。随着人类基因组计划的 逐步实施 ,基因组序列日趋明朗 ,下一步就是要确定各种不同基因的功能。这样 ,研究人员将 面临前所未有的压力 ,因此 ,必须建立高效、准确、自动的遗传信息分析系统 ,基因芯片技术 ,于 是应运而生。 ( ) 基因芯片 又称 DNA 芯片、寡核苷酸芯片等 最早由 E. Southern 在 1989 年提出 ,而后立 即受到了多方重视。基因芯片已经在基因表达分析、基因型判断等领域得到了广泛的应用 ,在 临床上 ,基因芯片技术在判定疾病的发生、药物的疗效等方面也可以起到重要的作用。美国加 ( ) 州的 Affymetrix 公司 隶属于葛兰素制药公司 在其首席执行官兼总工程师 Fodor 的领导下 , 已经制出了商品化的基因芯片。本文所介绍的基因芯片的许多技术细节,多来自该公司的网 ( ) 页 http/ / :www. Aff ymetrix. com 。 一、基因芯片的制造 基因芯片的制造 ,实际上就是将大量已知的探针 , 固定于选定的片基上 ,从而获得一高密 ( 2 ) 度 通常探针的密度在 65 000～600 000/ cm 的探针阵列。在制作基因芯片前 ,首先 ,要根据 所要测定的基因片断 ,确定可以与之杂交的探针阵列 ,而后 ,利用特殊的电脑程序 ,设计出用于 ( ) 合成该阵列的光刻底片 photolitho graphic masks , 以便进行下一步的合成。基因芯片探针阵 ( ) ( ) 列的合成应用了一种被称为光控化学合成 lightdirectedchemicalsynthesis 的技术 图1 ,它 ( ) ( ) 　国家自然科学基金重点项目资助课题 与国家重点基础研究发展规划资助项目 G1999053906 1·36 ·