利用特異性序列快速鑑別五種臨床具侵襲性曲霉菌種林彩秀1.pdfVIP

利用特異性序列快速鑑別五種臨床具侵襲性曲霉菌種 1 1 1 1 1,2 林彩秀 , 林建佑 , 徐利雲 , 劉素卿 , 施浤彰 1 中國醫藥大學附設醫院檢驗醫學部, 2 國立中興大學獸醫學系, 台灣 目的: 希望在傳統黴菌培養之前能夠快速鑑別侵襲性曲霉菌病,建立一套分子診斷方法 做為臨床檢驗之用。目前約有 180 餘種以上的曲霉菌 Aspergillus 被發現，在臨床上 多發生於免疫功能不足或缺損 immunocompromised 的患者身上,其中具有侵襲性曲 霉菌病 Invasive aspergillosis, IA 為五種,分別是: Aspergillus fumigatus , Aspergillus flavus, Aspergillus terreus, Aspergillus nidulans 及Aspergillus niger. 方法: 利用聚合酶鏈反應 PCR 方法,放大黴菌類 26S 核醣體 RNA rRNA 及內轉錄區域「Internal Transcribed Spacer 1 and 2 regions ITS1 ITS2 」,作為放大之標地物,再利用這五種侵襲性黴菌間之 差異性,快速予以鑑別。檢體來源為台灣中國醫藥大學附設醫院微生物科黴菌培養後之 檢體及美國臨床病理學會 CAP 之能力試驗檢體做為比較分析對象;我們設計一對引 子 primers 分 別 為 Aspergillus-specific universal primer pairs: Asp-F: 5’-CTGTCCGAGCGTCATTG-3’及ITS-R: 5’-TCCTCCGCTTATTGATAT-3’, 產物大小為 242-251 bp, 再將 PCR 產物予以基因定序,使用之定序儀器為 ABI PRISM model 3730 sequencer, 利用NCBI BLAST 比較分析 A. fumigatus , A. flavus, A. terreus, A. nidulans , and A. niger 間之差異性,再與待測產物之基因序列比較分析。 結果: 能夠百分之百鑑 別出黴菌培養及美國臨床病理學會 CAP 之能力試驗檢體,證明可利用於臨床快速鑑定, 作為臨床醫師使用抗黴菌藥之依據。 討論： 依照此一模式,當有PCR 產物 242-251bp 的時候但尚未作基因序列比對之前,可視為該檢體為黴菌篩檢陽性,臨床醫師可以考慮使 用抗黴菌藥或再比對其他檢驗 查 數據, 如 x-ray, 血清中 Aspergillus galactomannan enzyme-linked immunosorbent assay GM-ELISA 做為進一步判斷之依據。