原发性无精子症患者Y染色体AZF微缺失.pdfVIP

· 306 · 中国生育健康杂志2009年第20卷第5期 · 生 殖 医 学 · 原发性无精子症患者Y染色体AZF微缺失 陈治全 由家惠 张海涛 原发性无精子症是指男性不育症患者仅有精子 扩增温度及循环参数为95℃预变性3min，95℃ 异常，即精液检查发现无精子，其余包括细胞遗传 30s、59c=【30s、72℃30s共 35个循环，72℃延 学、生殖内分泌激素水平等情况均正常，即患者出 伸 10min。选择正常男性DNA样品为阳性对照，正 现精子异常的原因不明。从分子水平探讨生精障碍 常女性DNA样品为阴性对照，灭菌蒸馏水为空白对 的机制，尤其是关于Y染色体长臂AZF微缺失的 照。PCR反应结束后取8 扩增物加入 1．5 6× 研究 ¨J，对男性原发性无精子症的诊断及治疗具 上样缓冲液混匀后加样 ，Marker为 100bpDNA分子 有非常重要的意义，本文对 24例原发性无精子症 量标记 ，经 3．0％的琼脂糖凝胶 电泳 40min后， 患者Y染色体AZF微缺失筛查，报告如下。 KODAK1D凝胶成像仪观察电泳结果并拍照。 对象与方法 3．实验结果判定标准：所有男性标本都应扩 1．对象：2005年 6月 一2006年 12月到本院 增出SRY 内对照条带，若待测样品中无此条带， 不育治疗 中心就诊的男性不育患者，年龄 23～ 提示实验失败 ；若待测样品与正常对照相比，出现 42岁，无泌尿生殖道感染，无特殊病史及家族史， 一 个或多个 STS条带丢失，即可判断为其对应的 连续3次精液检查未发现精子，生殖内分泌激素检 STS缺失。 测在正常范围内，并排除染色体数 目与结构异常者 结果 纳人观察组，共24例；对照组4O例样本均来 自于 24例观察组样本 中，共检测出AZF微缺失 精液正常男性。 3例，缺失率 12．5O％(3／24)；其中单纯AZFe缺 2．AZF区域缺失检测方法：(1)基因组 DNA 失2例，AZFe+AZFb缺失 1例，单纯AZFe缺失 提取。抽取研究对象外周血2．0ml，EDTA抗凝， 率为8．33％ (3／24)，AZFb缺失率为4．17％(1／ 按常规(酚．氯仿法)提取 DNA。溶解后的DNA用 24)。对照组4O例样本均未检出AZF基因微缺失。 紫外分光光度计测吸光度 (260nm)并计算 DNA 讨论 浓度。(2)引物。采用上海透景生命科技有限公 Y染色体长臂许多基因是与精子发生相关的基 司提供的Y6PCR检测试剂盒 (LotN， 因，某些基因片段的丢失可造成生精障碍 J，提 按照试剂盒的要求每个样品均需做A组和 B组两 示Y染色体对性发育和精子发生都是必不可少的。 个多重 PCR反应 ，A组包括 Sy254(AZFc区)、 对男性不育患者进行染色体核型研究中发现，原发 sY127(AZFb)、sY86(AZFa)3个位点，B组包括 性无精子症患者Y染色体长臂远端(Yql1)在显微 Sy255(AZFc区)、sY134(AZFb)、sY84(AZFa) 镜下可见染色体断裂、缺失现象，因此，提出Y 3个位点。另外，每组设置一对扩增 SRY基因(位 染色体长臂存在着与精子发生相关的基因并将其命 于Y染色体短臂上的性别决定基因)的引物作为 名为无精子因子 (AZF)。AZF分为 AZFa、AZFb、 内对照。(3)PCR扩增及 电泳分析。每个标本检 AZFe3个区域，研究认为AZFa缺失较罕见 J，约 测需做A组和B组