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HPLC测定蒙药耧斗菜中咖啡酸的含量 包冬梅1斯琴白俊英（内蒙古民族大学 蒙医药学院，内蒙古 通辽 02800；2. 内蒙古通辽市蒙医研究所，内蒙古 通辽 028000） 摘要：目的 研究并建立了HPLC测定蒙药耧斗菜中咖啡酸含量的方法。方法 采用依利特ODS-C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱，流动相为甲醇0.05%磷酸水溶液（17：83），检测波长323nm，柱温 25℃，流速1.0mlmin，进样量10μl。结果 咖啡酸在0.0076～0.038μg (r=0.9995)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.83%（RSD=2.00%）。结论 该方法简便，准确。 关键词：高效液相色谱；蒙药耧斗菜；咖啡酸 耧斗菜收载于《中华本草（蒙药卷）》，是毛茛科多年生草本植物耧斗菜（Aquilegia viridiflora Pall）的干操全草，蒙语名叫乌日勒其额布斯，生长在潮湿地，全草入药，夏末、秋前采收。该药材味苦，性凉、软、重、稀、钝，具有通经活血，催产、下胎衣，疗伤，燥黄水，止痛之功效，主治月经不调、经血淋漓不止、胎盘滞留、腹痛、刀伤。 材料与仪器 高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10AVP紫外分光光度仪，FA2004电子天平（上海），Waters pro plus超纯水仪，色谱甲醇，其它试剂均为分析纯。对照品咖啡酸（TEL0228375478）购自天津一方科技有限公司，样品采自通辽市旱山（200707）、呼市喇嘛洞（200808）、呼市蛮汉山（200705）、植物园（200706）。经内蒙古民族大学蒙医药学院布日额教授鉴定为毛茛科耧斗菜。 2 方法与结果 2.1对照品溶液的配置 精密称取咖啡酸对照品7.6mg,置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液0.4ml置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（浓度为3.04μgml）。 2.2样品供试品溶液的配置 精密称取药材末（过药典检验筛）2.00g置具塞锥形瓶中，精密加入20%甲酸甲醇溶液20ml称定重量，加热回流2h，取出，放冷，称定重量，用20%甲酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，过滤，取续滤液（1mgml），即得。 2.3 检测波长的选定 将对照品咖啡酸适量容于甲醇中，进行光谱扫描，在323nm波长处有最大吸收，故选定323nm为咖啡酸的检测波长。 2.4色谱条件 色谱柱为依利特ODS-C18250mm×4.6mm,5μm，流动相为甲醇0.05%磷酸水溶液（17：83），检测波长323nm，柱温 25℃，流速1.0mlmin，进样量10μl。在此条件下咖啡酸可与其它成分基线分离，理论板数按咖啡酸计算大于8000。结果见图12。 图1 对照品色谱图 图2 样品色谱图 2.5线性范围的考察 分别吸取咖啡酸对照品溶液（浓度为3.04μgml）2.5、5、7.5、10、12.5 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。以进样量（C，μg）对峰面积积分值（A）进行线性回归。得回归方程为A=2838605.263C-868.8，r=0.9995。结果表明，咖啡酸进样量在0.0076～0.0380μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.6精密度试验 取对照品溶液（浓度为3.04μgml）10μl，连续5次进样，测定其峰面积，RSD=1.19%。表明含量测定方法的精密度良好。 2.7重复性试验 取同一批号（200707）供试品溶液（按“2.2”项下方法制备）10μl，连续5次进样，测定其峰面积，RSD=1.91%。表明含量测定方法的重复性良好。 2.8稳定性试验 取同一批号（200707）供试品溶液（按“2.2”项下方法制备）10μl，每隔2h进样，即在0、2、4、6、8h进样，测定其峰面积，RSD=1.89%。结果表明供试品溶液在8h内比较稳定，满足测定要求。 2.9加样回收率测定 精密称取已知含量的样品5份，每份2g，分别加入咖啡酸对照品溶液（浓度为3.04μgml）0.2ml，按“2.2”项下方法制备，精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积，按回归方程计算其含量，再计算回收率。结果见表1。 2.10样品测定 取4批耧斗菜，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果见表2表1 加样回收率测定结果 取样量（g） 样品含量（μg） 对照品加入量（μg） 测得总量（μg） 回收率（%） 平均值（%） RSD（%） 2g 2g 2g 2g 2g 35.508 35.508 35.508 35.508 35.508 15.2 15.2 15.2 15.2 15.2 52.033 52.