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环磷酰胺、乙酰苯肼致小鼠血虚模型及药物治疗 的血清总抗氧化能力评价 肖定洪 02 中基（七） 2002207132 摘 要：[ 目的]探讨环磷酰胺、乙酰苯肼制作小鼠血虚模型的血清总抗氧化能力变化以及四 物汤对乙酰苯肼致血虚模型小鼠的治疗作用。[方法] 以总抗氧化能力测定试剂盒测定小鼠血 清总抗氧化能力。[结果]小鼠环磷酰胺、乙酰苯肼血虚造模不成功，四物汤治疗作用不明显。 [结论] 小鼠环磷酰胺、乙酰苯肼造模气血阴阳虚证同时出现，而不是单纯的血虚证模型， 而四物汤只能改善乙酰苯肼造模的血虚证，而对气虚、阴虚等作用不明显。 关键词：环磷酰胺 乙酰苯肼 四物汤 小鼠 血清 总抗氧化能力 血虚证是临床常见疾病证型之一，文献报道中多以环磷酰胺、乙酰苯肼进行血虚证造模。 本实验以血清总抗氧化能力来评价环磷酰胺、乙酰苯肼造模，并观察四物汤对血虚证的改善 情况。 1 材料及方法： 1.1 材料： 1.1.1 动物：正常组小鼠、环磷酰胺组小鼠、乙酰苯肼组小鼠、四物汤组小鼠（均有上海中 医药大学动物实验中心提供）。 1.1.2 试剂：总抗氧化能力测定试剂盒（南京建成生物工程研究所） 1.1.3 仪器：EF 管（1.5ml）若干，一次性试管（10ml）若干，移液器（P20ul 、P100ul 、P1000ul ） 各一把，玻璃比色皿（3ml，1cm 光径），温浴箱，分光光度计，漩涡混匀器，普通离心机等。 1.2 方法： 1.2.1 血清的制备： 1.2.1.1 取 EF 管 38 支从 1 到 38 号编号，其中 1—10 号代表正常组，11—20 号代表环磷酰 胺组，21—30 号代表乙酰苯肼组，31—38 号代表四物汤组。 1.2.1.2 取血：正常组、环磷酰胺组、乙酰苯肼组、四物汤组小鼠眼眶取血 0.5ml 以上于相 应编号 EF 管中，同时处死小鼠。 1.2.1.3 用移液器 EF 管中血液与管壁交界面轻轻的刮四周，注意用力要轻，防止溶血。 1.2.1.4 离心：取全血 3500 转/分离心 15 分钟得血清待测。 1.2.2 总抗氧化能力测定： 1.2.2.1 试剂盒组成及配制： 试剂一：液体 60ml ×2 瓶，4 ℃保存。 试剂二：粉剂×2 支，用时每支加双蒸水至 120ml，室温保存。 试剂三：黄色贮备液 10ml×1 瓶，避光冷藏保存。贮备液得稀释液 60ml×1 瓶。 试剂三应用液的配制：临用前取贮备液以稀释液稀释，比例为 1：19。需多少配制多少。 试剂四：溶液 24ml×1瓶。 1.2.2.2 操作： 表 1 总抗氧化能力测定流程 对照管 测定管 试剂一 0.5 0.5 血清 — 0.1 试剂二 1.0 1.0 试剂三应用液 0.25 0.25 漩涡混匀器充分混匀，37℃水浴 30 分钟。 试剂四 0.05 0.05 蒸馏水 0.1 — 漩涡混匀器充分混匀，室温放置 10 分钟，蒸馏水调零，1cm 光径，520nm 处测各管吸 光度。（37℃时，每分钟每毫升血清使反应体系的吸光度（OD）值每增加 0.01 时，为一个总 抗氧化能力单位）。 1.2.2.3 计算： 总抗氧化能力（单位/毫升血清）=（测定管 OD-对照管 OD）/0.01/30*19 1.3 统计方法： 采用 spss12.0 统计软件中的 One-Way ANOVA 及相关分析。 3 实验结果： 实验中，首次测定出结果后发现结果与预期结果有较大差距，故于一周后重复检测一次， 结果表 2 所示。 表 2 两次测定各组小鼠血清总抗氧化能力的变化（单位/毫升血清，