无载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸研究.pdfVIP

http :// 载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸的 研究1 姜绍通，郑志，罗水忠，潘丽军 合肥工业大学生物与食品工程学院，合肥 (230009 ） E-mail:j iangshaotong@ 要： 究了无载体固定化米根霉发酵葡萄糖清液生产L-乳酸的工艺，使菌体在发酵过程 中形成直径为 1.0-2.0mm 的菌丝体小球从而实现其无载体固定化，得到摇瓶发酵关键参数 为：首批次发酵碳源为120g/L 葡萄糖清液，氮源为3g/L 硝酸铵，培养基中K+和Na+浓度 比为 1:1，发酵温度32 ，摇瓶转速200r/min ，发酵时间 72h；重复批次发酵碳源为80g/L 葡萄糖清液。无载体固定化米根霉摇瓶发酵工艺首批 L-乳酸产量可达 100.8g/L ，葡萄糖转 化率为84% ；重复批次生物量稳定在12.69g/L ，产酸速率达2.512g L- 1/h，发酵24h 葡萄糖 转化率高于 75% ，重复间歇发酵 16 批次米根霉菌丝体小球形态稳定，L-乳酸产量保持在 60.0g/L 以上。 关键词： L-乳酸 米根霉 形态 无载体固定化 反复间歇发酵 + 中图分类号 TQ921 . 3 1．引言 利用米根霉发酵生产L-乳酸，具有发酵产物光学纯度高、营养要求简单、产物容易提纯 [1] 等优点 。采用固定化米根霉发酵生产L-乳酸，与游离发酵相比，可大大缩短生产周期，并 且解决了发酵过程中出现的结团现象，传质效果好，重复使用多次后依然保持较高的活性 [2-5] 。无载体固定化即利用细胞自絮凝形成的颗粒作为一种固定化细胞的方法，是固定化 [6] 胞技术中全新的概念 。与各种载体固定化细胞技术相比，这种无载体固定化 胞技术具有 非常突出的优点，主要体现在：① 细胞的固定化方法非常简单，一般在摇瓶培养阶段就可 以快速形成絮凝颗粒，培养液澄清透明，然后絮凝 胞颗粒可以在生物反应器中逐级扩大培 养，不产生细胞固定化过程的附加成本。② 不使用细胞生长和代谢产物生物合成所需营养 物质以外的其它任何化学物质，细胞的生理和生态环境不受外来物质的干扰和影响，有利于 目标代谢产物的顺利合成。③ 自絮凝 胞颗粒内部结构呈松散型，传质阻力很小，而且其 颗粒内部表面不断自我更新，颗粒整体活性非常好。④ 在生物反应器中一定的生理、生态、 物理、化学和流体力学条件下，小颗粒的絮凝和大颗粒的解离可以呈动态平衡，不存在载体 [7] 固定化细胞的强度问题 。无载体固定化米根霉发酵生产L-乳酸工艺可以在产酸发酵的同时 获得适合的菌体形态实现固定化工艺，无需附加固定化载体，成本低廉，具有操作简便、生 [8-9] 产强度高、对菌体损伤小、生产稳定性好等优点 。无载体固定化米根霉发酵生产L-乳酸 具有很广阔应用前景。本研究拟通过发酵工艺调控，以控制形成一定粒径的米根霉菌丝球， 并以此实现米根霉无载体固定化发酵生产L-乳酸。研究的结果为最终