细胞分子生物学技术在靶向药物筛选中应用.pptVIP

细胞分子生物学技术 在靶向药物筛选中的应用 作者：刘陆军 药学1101班 主要内容： 1、基因克隆技术在确定药物靶点中的应用 2、生物芯片在药物靶标筛选等研究的应用 3、流式细胞术在新药筛选研究中的应用 一、基因克隆技术在确定药物靶点中的应用 1、高通量筛选和高内涵筛选在药物靶基因功能研究中的应用 高通量筛选 ：高通量筛选(High throughput screening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机对实验数据进行分析处理，同一时间对数以千万样品检测，并以相应的数据库支持整体运转的技术体系。 高内涵筛选：高内涵筛选是指在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号传导等方面的影响，在单一实验中获取大量与基因、蛋白质及其他细胞成分相关的信息，确定被筛样品生物活性和潜在毒性的过程。高内涵筛选应用高分辨率的荧光数码影像系统获得被筛样品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息，对其多角度分析。 常用仪器设备 1、Whatma过滤型做孔板 2、高通量平行合成仪 3、高通量平行合成仪 3、215全自动移液工作站 高通量筛选技术常用方法： 微孔板的使用和光学检测法 工程菌株的裂解 报告基因 流式细胞技术 蛋白质芯片 高通量筛选的技术过程： 1、样品库 2、初筛和复筛 3、活性化合物 4、深入筛选 5、获得少量先导化合物 6、确证筛选药物药理学研究 7、侯选药物 8、临床前研究 2、转基因技术在药物作用靶点研究中的应用 基因敲入是利用基因同源重组，将外源有功能基因转入细胞与基因组中的 同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。 基因敲除是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定 的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。 基因敲除的必备条件 1、要有将外援基因导入宿主细胞的载体 2、能接受外援基因的受体（常用胚胎干细胞） 基因敲除载体导入ES细胞 将基因敲除载体导入ES细胞，以载体上的neo基因置换ES细胞基因组的目的基因，从而得到 基因敲除细胞 。 二、生物芯片在药物靶标筛选等研究的应用 基因芯片在靶向药物筛选中的应用基因芯片在基因水平上寻找药物作用的靶标根 据芯片上固定的探针不同 ,生物芯片包括基因芯片 、蛋白质芯片 、芯片实验室等 。 基因芯片检测原理及简要过程 基 因 芯 片 流 程： 样品制备 芯片制备 杂交信号检测 数据分析 杂交 蛋白质芯片在靶蛋白药物中的应用蛋白质芯片能同时分析上千种蛋白质与生物分子的作用情况 (酶 /底物 、抗体 /抗原 、配体 /受体 、蛋白质 /核酸或小分子 ) ,在药物和蛋白质之间架起了一座桥梁 。  原理： 芯片上固定的分子是蛋白质如抗原或抗体等； 蛋白分子、蛋白与核酸、蛋白与其它分子的相互作用 应用： 蛋白质的结构功能研究；医学诊断和医疗； 新药开发；生物工业等 难点： 蛋白质的纯度；蛋白质的固定 三、流式细胞术在新药筛选研究中的应用 流式细胞术 ( flowcytometer, FCM )是一种对细胞 、细胞器和生物大分子进行快速多参量分析的细胞定量分析技术 ,可以测量细胞荧光染色强度 ,定量测定细胞和亚细胞成分 。 流式细胞仪（Flow Cytometer)集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。 流式细胞仪特点： 单细胞悬液或生物颗粒 分析速度高 多参数 精度高 流式细胞仪检测范围： 流式细胞仪的工作原理： 光学系统 激光光源 光收集系统 液流系统 流动室 液流驱动系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统 流式细胞术操作流程： 谢 谢！