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微生物学实验操作考核试题及评分标准 实验一： 消毒、灭菌、无菌操作及实验室注意事项 步骤 考核目标及评分细则 满分值 一 二 选择仪器、药品和培养基： 　培养皿（2包），试管、吸管、自动式高压蒸汽灭菌锅、紫外线灯、注射器，微孔滤膜（0.22μm），镊子和玻璃涂棒等。 蒸馏水、无水乙醇、大肠杆菌菌种培养斜面，牛肉膏蛋白胨培养基/LB培养基等。 10分 三 进行实验： 1、采用紫外线灭菌法，插上电源，掌握无菌操作台的按钮各个功能，进行无菌操作室、无菌操作台灭菌，灭菌30分钟。（10分） 2、进行培养皿、枪头等包扎，掌握干热灭菌、高压蒸汽灭菌操作方法。（10分） 3、掌握过滤灭菌的方法，正确使用过滤器、滤膜的操作步骤（吸液、安装、过滤）。（10分） 4、无菌操作技术 （1）固体培养基加热溶化。（10分） （2）70%的酒精擦洗操作台面，无菌操作台倒平板。（10分） （3）无菌操作台接种大肠杆菌进行四分法划线。（10分） （4）划线的培养基进行37℃培养。（10分） 70分 五 根据实验现象得出结论： 掌握干燥灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外灭菌、过滤灭菌的操作方法，观察无菌操作的接种划线的效果，有无单个菌落出现。 10分 六 实验后整理： 无菌操作台、无菌操作室进行清理。洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 10分 设计实验步骤： 1、LB培养基制备 操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口，包扎、标记、灭菌。（10分） 2、牛肉膏蛋白胨培养基制备 操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口，包扎、标记、灭菌。（20分） 3、高氏一号培养基制备 操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口，包扎、标记、灭菌。（20分） 4、马丁氏培养基制备 操作步骤如称量、加入孟加拉红溶液、液体分装、加琼脂、封口膜封口，包扎、标记、灭菌。（20分） 实验需要的仪器和药品 酒精灯、灭菌牙签和棉签、无菌水、灭菌培养皿等。 牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基。 设计实验步骤： 1、倒平板 培养基加热溶化，无菌操作台倒平板，使其凝固待用。（10分） 2、标记 分别在2套平板的底部划分出4个小区，并在其边缘写上名字和日期，在4个小区内分别标明待接种的样品名。在另2套平板的底部标记名字、日期及空气1和空气2。（20分） 3、人体表面微生物的检查 用手指表面（洗手前后）、头发、鼻腔、门把手、灰尘、操作台等处进行轻接，盖上皿盖。（20分） 4、实验室环境的检查 两个标记有“空气1”、“空气2”的平板，分别放置无菌空气、空气中静置1h。（10分） 5、培养 将所有平板翻转，倒放置37℃培养1-2d。（10分） 得出结论： 掌握实验室和人体表面微生物菌落数量、类型，了解微生物无处不在。 实验后整理： 无菌操作台、无菌操作室进行清理，擦洗。所用的培养基的三角瓶、洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 设计实验步骤： 1、显微镜计数 （1）菌悬液制备：5ml的无菌生理盐水加到酿酒酵母或米曲霉培养斜面上，用无菌环来回刮取，倒入盛有5ml生理盐水和玻璃珠的三角烧形中，充分振荡使细胞分散。（10分） （2）检查血细胞计数板：95%的乙醇棉球轻轻擦洗，用吸水纸吸干或用电吹风吹干。（10分） （3）加样品：再用无菌的毛细滴管吸入一小滴菌悬液，进入计数室，静置5min，进行观察。（5分） （4）显微镜计数：进行计算。（5分） （5）清洗：将血细胞计数板及盖玻片进行清洗。（5分） 2、悬滴法观察 （1）制备悬液：制成轻度浑浊的菌悬液。（10分） （2）涂凡士林涂在盖玻片的四周。（10分） （3）加菌液：盖玻片中央滴一小滴菌液。（5分） （4）盖凹载玻片：将凹载玻片反转，轻轻盖在盖玻片上，黏合在一起，翻转。（5分） （5）镜检：先用低倍镜进行观察，后用高倍镜进行观察。（5分） 得出结论： 掌握使用显微计数法、悬滴观察法进行细菌、真菌计数，观察细菌的形态、运动方式。 实验后整理： 显微镜放置好，要清洗的器皿进行清理，并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 ）