环境工程微生物学实验操作考核试题及评分标准.docVIP

环境工程微生物学实验操作考核试题及评分标准 实验一：常用显微镜的使用方法及注意事项 步骤 考核目标及评分细则 满分值 一 二 选择仪器、药品： 　10分 三 进行实验： 1、（0分） 2、。（0分） 3、（0分）70分 五 根据实验现象得出结论： 10分 六 实验后整理： 操作台、。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 10分 培养基的配制玻璃器皿的包扎灭菌步骤 考核目标及评分细则 满分值 一 二 选择仪器、药品和培养基： 高压蒸气灭菌锅、试管、培养皿等 10分 三 进行实验： 1、培养基的制备 （1）称量2）溶化（3）定容：（4）调PH值平板的制作 培养基溶化后，待冷却至50左右倾入无菌的培养皿中。培养基的无菌检查无菌水的制备高压蒸气灭菌锅的使用放回内层锅，并装入待灭菌物品加盖加热本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。关闭热源将取出的灭菌培养基放入37℃培养箱培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。70分 五 结论检查培养基灭菌是否彻底。高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物？（2）灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？10分 六 实验后整理： 无菌操作台、无菌操作室进行清理。洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 10分 ）实验需要的仪器和药品 酒精灯、灭菌牙签和棉签、无菌水、灭菌培养皿等。牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基。 10分 三 设计实验步骤： 将所有平板翻转， 70分 四 得出结论：实验后整理： 无菌操作台、无菌操作室进行清理，擦洗。所用的培养基的三角瓶、洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 得出结论： 观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并分析不同化学药剂对不同菌的抑菌效果。 设计实验步骤： 1、显微镜计数 （1）菌悬液制备：5ml的无菌生理盐水加到酿酒酵母或米曲霉培养斜面上，用无菌环来回刮取，倒入盛有5ml生理盐水和玻璃珠的三角烧形中，充分振荡使细胞分散。（10分） （2）检查血细胞计数板：95%的乙醇棉球轻轻擦洗，用吸水纸吸干或用电吹风吹干。（10分） （3）加样品：再用无菌的毛细滴管吸入一小滴菌悬液，进入计数室，静置5min，进行观察。（5分） （4）显微镜计数：进行计算。（5分） （5）清洗：将血细胞计数板及盖玻片进行清洗。（5分） 2、悬滴法观察 （1）制备悬液：制成轻度浑浊的菌悬液。（10分） （2）涂凡士林涂在盖玻片的四周。（10分） （3）加菌液：盖玻片中央滴一小滴菌液。（5分） （4）盖凹载玻片：将凹载玻片反转，轻轻盖在盖玻片上，黏合在一起，翻转。（5分） （5）镜检：先用低倍镜进行观察，后用高倍镜进行观察。（5分） 得出结论： 掌握使用显微计数法、悬滴观察法进行细菌、真菌计数，观察细菌的形态、运动方式。 实验后整理： 显微镜放置好，要清洗的器皿进行清理，并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。 实验需要的仪器和药品 酒精灯、灭菌牙签和棉签、无菌水、灭菌培养皿等。 牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基。 设计实验步骤： 1、倒平板 培养基加热溶化，无菌操作台倒平板，使其凝固待用。（10分） 2、标记 分别在2套平板的底部划分出4个小区，并在其边缘写上名字和日期，在4个小区内分别标明待接种的样品名。在另2套平板的底部标记名字、日期及空气1和空气2。（20分） 、实验室环境的检查 两个标记有“空气1”、“空气2”的平板，分别放置无菌空气、空气中静置1h。（10分） 、培养 将所有平板翻转，倒放置37℃培养1-2d。（10分） 得出结论： 掌握生物菌落数量、类型，了解微生物无处不在。 实验后整理： 无菌操作台、无菌操作室进行清理，擦洗。所用的培养基的三角瓶、洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁，实验后洗手。