电化学免疫传感器研究及应用进展.pptVIP

免疫分析之 ------ 免疫传感器 第11组 主要内容 免疫传感器原理 免疫传感器的分类 免疫传感器的制作 免疫传感器的应用 免疫传感器的发展趋势 免疫传感器原理 1990年 Henry 等提出了免疫传感器的概念。免疫传感器是将高灵敏度的传感技术与特异性免疫反应结合起来, 用以监测抗原- 抗体反应的生物传感器。免疫传感器的工作原理和传统的免疫测试法相似, 属于固相免疫测试法, 即把抗原或抗体固定在固相支持物表面, 来检测样品中的抗体或抗原。 由于免疫传感器技术具有分析灵敏度高、特异性强、使用简便及成本低等优点, 目前它的应用已涉及到临床医学与生物检测技术、食品工业、环境监测与等领域。 免疫传感器的分类 根据标记与否可分为非标记型免疫传感器和标记型免疫传感器 根据换能器种类的不同, 又可分为电化学免疫传感器、压电免疫传感器、热量测量式免疫传感器和光学免疫传感器等。 非标记与标记免疫传感器 非标记免疫传感器的工作原理是将抗体或抗原固定于膜或电极表面， 当发生免疫反应后， 抗体与抗原形成的结合物改变了膜或电极表面的物理性质(如表面电荷密度、离子在膜内的传输速度等)，从而引起膜电位或电极电位的变化。 标记免疫传感器是一种具有化学放大作用的传感器， 通常以酶为标记物，此外还有荧光试剂、化学发光试剂、核素或金属标记物。 电化学免疫传感器 电化学免疫传感器是基于抗原-抗体反应的,可进行特异性的定量或半定量分析的自给式的集成器件,其中抗原/ 抗体是分子识别元件,且与电化学传感元件直接接触 ,并通过传感元件把某种或者某类化学物质浓度信号转变为相应的电信号。 电化学免疫传感器是免疫传感器中研究最早，种类最多，也较为成熟的一个分枝。根据它测量方式的不同又可分为电位测量式、电流测量式、导电测量式。 电位免疫传感器 1975年Janata首次描述了用来监测免疫化学反应的电位测量式免疫传感器。 这种免疫测试法的原理是先通过聚氯乙烯膜把抗体固定在金属电极上, 然后用相应的抗原与之特异性结合,抗体膜中的离子迁移率随之发生变化, 从而使电极上的膜电位也相应发生改变。膜电位的变化值与待测物浓度之间存在对数关系, 因此根据电位变化值进行换算, 即可求出待测物浓度。 1991年Ghindilis提出另一种电位免疫传感器，是用一种具有电催化活性的生物催化剂(如乳糖酶) 来标记抗胰岛素抗体, 与固定在电极上的胰岛素特异性结合,乳糖酶催化电极上氧的电还原反应, 从而使电极上电位增加, 其增加值与溶液中游离抗原(胰岛素) 浓度有比例关系。 电位免疫传感器的问题是信噪比低,因为大多数生物分子上的电荷密度相对于背景干扰(如离子) 来说较低; 另外, 信号反应对pH 值和离子强度等条件有明显依赖性, 被测电位与离子活性有关。 电流型免疫传感器 该类传感器的原理主要有竞争法和夹心法2种。前者是用酶标抗原与样品中的抗原竞争结合氧电极上的抗体, 催化氧化还原反应, 产生电活性物质, 从而引起电流变化, 测量此变化值便可得出样品中抗原浓度。后者则是样品中的抗原与氧电极上的抗体结合后, 再加酶标抗体与样品中的抗原结合, 形成夹心结构, 从而催化氧化还原反应产生电流值变化。 电流免疫传感器一般都靠标记, 且标记物都是酶类, 包括乳糖酶、碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶等。近些年, 一些新的具有电化学活性的化合物(如对氨基酚及其衍生物、聚苯胺)和金属离子也在电流免疫传感器中被用作标记物。 电导型免疫传感器 导电率测量法可大量用于化学系统中, 因为许多化学反应都产生或消耗多种离子体, 从而改变溶液的总导电率。通常是将一种酶固定在某种贵重金属电极上(如金、银、铜、镍、铬) ,在电场作用下测量待测物溶液中导电率的变化。 1992 Sandberg描述了一种以聚合物为基础的导电率测量式免疫传感器, 它与常规的酶联免疫吸附试验原理基本相同, 只是后者的结果是通过颜色来显示, 而它则是将结果转换成电信号。 由于待测样品的离子强度与缓冲液电容的变化会对这类传感器造成影响, 加之溶液的电阻是由全部离子移动决定的, 使得它们还存在非特异性问题,因此导电率测量式免疫传感器发展比较缓慢。 压电免疫传感器 压电免疫传感器是最常见的一种质量测量式免疫传感器, 它的原理是石英晶片在振荡电路中振荡时有个基础频率, 当样品中的抗原或抗体与包被在晶片上的抗体或抗原结合时, 由于负载的增加, 晶片的振荡频率会相应减少, 其减少值与吸附上去的质量有相关性。这种相关性可用Sauerbrey 方程表示, 即△F