AFLP分子标记发展与应用.pdfVIP

Sciences 山东农业科学2010，5：10—14 ShaIldongAgIicultural AFLP分子标记的发展及应用 刘 静 (曲阜师范大学生命科学学院，山东曲阜273165) 摘要：扩增片段长度多态性(AFLP)是一种高效的DNA分子标记技术，近年来其研究方法和检测技术 不断改进和优化，并由此衍生出多种相关技术，使其在遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位等研 究中得到广泛的应用。本文即对AFLP的原理、衍生技术及其应用等进行了介绍。 关键词：分子标记技术；AFLP；应用 中图分类号：Q503文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2010)05—0010一05 分子标记是指能反映生物个体或种群间基因 1 AFIJP标记的基本原理、操作流程及技 组中某种差异特征的DNA片段，直接体现基因组 术关键 DNA间的差异。在过去30多年，DNA分子标记 1．1 AFLP标记的原理 得到了迅速发展。扩增片段长度多态性(缸npli- 6ed Fra舯entkngtllPol严。印hi蛐，AFLP)技术AFLP标记的原理是对基因组总DNA酶切 为第二代分子标记技术，是在随机扩增多态性 后经PCR进行选择性扩增。先将基因组DNA用 DNA，RAPD)和两种限制性内切酶酶切成大小不等的片段，并与 (RandomAmplifiedPolylllo呐ic 含有粘性末端的人工接头相连，形成酶切位点不 限制性片段长度多态性(Restriction嘶ent kngtll 同的限制性酶切片段，然后用与接头和位点相匹 Pol舯。印hism，RFLP)技术上发展起来的 配的引物进行预扩增，预扩增产物作为进一步 DNA多态性检测技术，同时拥有RFLP的高重复 性和RAPD简便快捷的特点。同其他以PCR为PCR扩增的模板，再选用特异引物进行选择性扩 基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到增，扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异 大量的位点和多态性标记，具有覆盖面广、高保真 的限制性片段分离。由于不同来源DNA的酶切 性、高效性、高分辨率、DNA用量少、事先勿需知 片段存在差异，因而产生了扩增产物的多态 道序列任何信息、可在全基因组产生标记、标记的 性‘21。 分离遵循盂德尔遗传规律等优点，自1995年由1．2操作流程 zabeau和V∞…创建以来，已在动物、植物和微生 AFLP标记的具体操作流程¨1为：①DNA提 物的分子系统学研究中得到应用，具有广阔的发 取和质量检测；②双酶切和酶切片段连接；③酶切 展前景。 连接片段的预扩增；④选择性扩增；⑤扩增产物 收稿日期：20lO—Ol-15 作者简介：刘静(1979一)，女，硬士，讲师。E—111ail：liujin妒12@163．咖 京林业大学学报，2000，22(6)：79—83． [6】李昆．I一63杨和I一69杨组织培养研究[D】．武汉：华 [2】 马同富，马宗新．杨树叶片高效离体再生系统的构建[J】． 中农业大学硕士论文，2007． 中国农学通报，2007，23(12)：88—92． [7】王玉珍，刘香玲，罗景兰．大叶饲料型刺槐组培技术体系的 [3】王学聘，韩一凡，戴莲韵，等．抗虫转基因欧美杨的培育 研究[J】．山