WGA扩增操作原理步骤介绍.pdf

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2017-09-01 发布于广东
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WGA扩增操作原理步骤介绍什么是WGA 全基因组扩增(whole genome amplification，WGA) 是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。为什么WGA 法医科研考古单细胞水平，微量 DNA 临床诊微生物，断环境为什么WGA DNA测序，文库制备目标DNA富 Micro- 集，探针制备 array WGA产物 RFLP或 PCR， SSCP 基因克隆 WGA在PGD中的应用胚胎活检 IVF 全基因组扩增 PCR/qPCR 高通量测序 SNP芯片/arrayCGH WGA类型以PCR为基础的WGA：简并寡核苷酸引物PCR (DOP-PCR) 连接反应介导的PCR (LM-PCR) 扩增前引物延伸反应(PEP-PCR) 以等温扩增为基础的WGA：多重链置换扩增(MDA) 基于引物酶的全基因组扩增(pWGA) 多次退火环状循环扩增技术(MALBAC) DOP-PCR Degenerate oligonucleotide primer- PCR 简并寡核苷酸引物：引物结构： 5’端约10nt序列— PCR引物结合 N6简并序列 — 随机结合模板 3’端约6nt序列 Rubicon Genomics Inc. —— PicoPlex kit Sigma Aldrich Inc. —— GenomePlex kit OmniPlex文库技术 BlueGnome Inc. —— SurePlex kit Sigma Aldrich为例 DOP-PCR 单细胞裂解和 gDNA打断 OmniPlex文库：基因组随机片断化，形成一系列短且重叠的