解脲支原体第一群的分型研究.x.docxVIP

解脲支原体第一群的分型研究解脲支原体第一群的分型研究中华皮肤科杂志 1999年第3期第32卷 论著作者：孔繁荣　周向昭　马燕燕　朱学骏单位：孔繁荣，马燕燕，朱学骏　100034北京，北京医科大学第一医院皮肤科，周向昭　张家口医学院附属第一医院皮肤科关键词：解脲支原体血清分型【摘要】目的　利用分子生物学方法对解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)第一群进行分型，建立简便、可靠的分型方法。方法设计分型引物，用PCR和限制性内切酶消化的方法进行分型。结果　设计了解脲支原体的分型引物UMS51|UMAU1和UMS51|UMAU3，前者扩增出Uu1型和Uu6型，后者扩增出Uu3型和Uu14型。对于Uu1型和Uu6型，用限制性内切酶消化的方法区分。结论　根据MB抗原基因的N端，利用PCR结合限制性内切酶消化的方法可以对解脲支原体第一群进行分型，但不能将Uu3型与Uu14型区分开。Serotyping of Biovar One of Ureaplasma Urealyticum byMolecular Biological MethodsKONG Fanrong,ZHOU Xiangzhao, Ma Yanyan,et al. Department of Dermatology, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034【 Abstract】 Objective To set up serotyping methods of Ureaplasma urealyticum by molecular biological techniques.Methods Primers for typing were designed and different serotypes of Ureaplasma urealyticum were identified by PCR and restriction endonuclease digestion.Results PCR primers UMS51, UMAU1 and UMS51,UMAU3 was specific to Uu1,Uu6 and Uu3, Uu14 respecitively. To distinguish Uu1 and Uu6, restriction endonuclease digestion were used.Conclusion By PCR and restriction endonuclease digestion on the basis of DNA sequence of N terminal of multiple? banded antigen gene, serovars of biovar one of Uu can be distinguished but Uu3 and Uu14 can not be distinguished.【 Key words】 Ureaplasma urealyticum Serotyping解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)分为2个生物群和14个血清型，第1群包括1、3、6、14四个血清型,第2群包括其余10个血清型。人类泌尿生殖道寄居或感染的Uu绝大部分为第1群，其中某些型与疾病有关，所以Uu的分型对疾病的发病机制研究有重要的作用。MB(multiple?banded)抗原是Uu的主要外膜抗原，是Uu感染时被识别的主要抗原。MB抗原基因长1200多个碱基，N端1/3是保守区，C端2/3是可变区。C端的大小可变，而N端在同一生物群各血清型和同一血清型各变异株中长度一致。我们利用MB抗原基因N端，通过PCR扩增结合限制性内切酶消化的方法对Uu第1群进行分型，初步建立了一个特异性强、可靠性好的分型方法。材料与方法(一)分群研究:1.标准菌株：Uu1、3、6、8、14血清型标准株由首都儿科研究所细菌室提供。2.DNA模板的制备：按我科实验室常规进行DNA模板的制备。3.分群引物：参照Teng等的设计,设计合成了下列引物(由美国Cybersyn公司合成)。①Uu通用引物：UMS?125：5′?GTATTTGCAATCTTTATATGTTTTCG?3′，UMA226：5′?CAGCTGATGTAAGTGCAGCATTAAATTTC?3′。第1群扩增片段长度为403bp,第2群为448bp。②Uu第1群特异引物：UMS51：5′?TGTGGATCCTTCTGGGCTATGACATTAGGTGTTACC?3′,UMA427：5′?CTCGAATTTCACCTGGTTGTGTAGTTTCAAAGTTCA