甘蔗乙烯合成酶基因家族三个成员克隆与序列分析.pdfVIP

维普资讯 热带亚热带植物学报 2005，13(6)：485—492 JournalofTropicalandSubtropicalBotnay 甘蔗乙烯合成酶基因家族三个成员的 克隆与序列分析 王爱勤 ，杨丽涛 ，王 自章2，韦宇拓 ，何龙飞 ，李杨瑞 (1．广西大学农学院，南宁530005；2．中国科学院植物研究所，北京 100093； 3．J西大学生命科学与技术学院，南宁530005；4．广西农业科学院，南宁530007) 摘要：ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid)合成酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据已克隆的植 物』4CS(1-aminocyclopropane·1-carboxylicacidsynthase)基因同源序列，设计简并引物，以甘蔗叶片总DNA为模板，通 过PCR扩增，得到3条特异性强的扩增片段：Sc-ACS1为 1041bp、Sc-ACS2为 1345bp和5c-ACS3为 1707bp。将序 列在GenBank核酸数据库进行同源性搜索，结果表明，3个片段均为』4c5基因，推导编码的蛋白质序列分别包含326、 242和 310个氨基酸。其中，＆ CS1和 ＆ CS3同源性最高，核苷酸序列和蛋白质氨基酸序列分别有 98％~U96％同 源，与禾本科植物玉米ZmACS6、水稻OS-ACS2、毛竹等』4cs基因家族也有很高的同源性，核苷酸序列同源性为88％一 98％，蛋白质氨基酸序列同源性为73％一81％。甘蔗Sc-ACS2与水稻OS-ACS5在核苷酸和氨基酸序列上分别有91％和 79％同源性，但与甘蔗Sc-ACS1和5c CS3基因成员之间，氨基酸同源性分别只有45％~U49％。系统进化分析表明， Sc-ACS1和Sc-ACS3基因与玉米ZmACS6基因亲缘关系最近，而Sc-ACS2基因与水稻 OS-ACS5基因亲缘关系最近。 Southern杂交表明三基因在基因组中确实存住Imn．是多拷贝基因。三个片段已在GenBank数据库中注册，注册号分别 为AY620985、AY620986和 AY788919。 关键词：甘蔗；ACC合成酶；基因家族：克隆 中图分类号：Q781 文献标识码：A 文章编号：1005—3395(2005)06—0485—08 CloningandSequenceAnalysisofThreeM embers ofACC SynthaseGeneFamilyinSugarcane WANG Ai—qin，YANG Li—tao，WANG Zi—zhang，WEIYu-tuo。，HE Long-feil7LIYang—rui4 (1．AgricuhuralCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2．InstitutesofBotany,theChineseAcademyofSciences， Beijing100093，China；3．BiotechnologyResearchCenter,GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 4．GuangxiAcademyofAgricultureSciences，Nanning530007，China) Abstract：ACC (1一aminocyclopropane一1一carboxylicacid) synthase (ACS)iSoneofthekeyrate—limiting enzymesforethylenebiosynhtesisinhigherplants．Inthispaper，twodegenerateoligonucleotideprimerswere designed，codingforconservativeaminoacidre