第四代HIV（1＋2型）酶免检测试剂盒的研究.pdfVIP

第27卷 第6期 河 南 科 学 Vo1．27 No．6 2009年 6月 HENAN SCIENCE Jun．2009 文章编号：1004—3918(2009)06—0681—04 第四代HIV(1+2型)酶免检测试剂盒的研究 唐秋艳 ， 陈兴业 ， 史 楠 ， 李新举 z， 陈绮铭 3 (1．河南省科学院生物研究所有限责任公司，郑州 450008； 2．上海华泰生物工程实业有限公司，上海 200333； 3．河南大学，河南 开封 4750o1) 摘 要：采用酶联免疫夹心法，通过改变包被抗原不同组分的量及酶稀释液配方等方法，使得新一代HIV(1+2型) 酶免检测试剂盒研制成功． 关键词：HIV；灵敏度；特异性 中图分类号：Q814．9 文献标识码：A 酶联免疫法检测人体免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)是常用的方法，也是HIV抗体 初筛试验方法之一．追溯酶联免疫法HIV抗体的检测，到 目前大致可以分为四代产品：第一代产品是在20 世纪80年代，所用原料为天然HIV抗原，由于当时HIV病毒培养提纯困难 ，所以产品既不安全又不准确；第 二代产品主要是 以多肽合成抗原为原料检测HIV抗体，多肽抗原分子量难 以重复HIV的天然构象，所 以灵 敏度和特异性不高；第三代产品采用基因工程抗原抗抗体法，该方法 比较费时；第四代 HIV(1+2)型抗体酶 免检测试剂盒是采用夹心一步法技术，具有快速、简便、准确等特点，目前国际同类产品也是采用该项技术， 河南理利生物工程有限公司研制出的双抗原夹心一步法的产品各项指标均达 国际先进水平，其 目的是有效 控制艾滋病的传播 ． 1 试验材料与方法 1．1 材料 1．1．1 主要原料 HIV抗原由深圳进丰生物有限公司提供，HIV阳性血清：由深圳进丰生物有限公司提供，HIV 阴性血清：由临床中筛选，96孔聚氯乙烯微孔反应板 由厦门金灿华公司提供，化学试剂：Triton—xlO0由美国 sigma公司提供，其余试剂均为国产分析纯． 1．1．2 标准品及对照品 HIV标准品由中国生物制品检定所购进，对照产品由Abbott公司、Orth公司、Organon 公司提供． 1．1．3 主要仪器 瑞典安玛西亚公司生产的AKTAPuri6erl00蛋白质纯化仪 ，北京长安科学仪器厂生产的 HH．W21．600型电子恒温水箱，芬兰雷勃公司生产的MK3型酶标仪和DEF型包被机，北京天时医疗用品制 作所生产的DEM—III型洗板机、ZF型封闭机和ZMX一48型酶标洗板机 ． 1．2 方法 1．2．1 试验设计 HIV酶免诊断试剂盒是由包被板、酶结合物、标本稀释液、底物液A、底物液B、洗涤液和 终止液等组分组成，该方案采用改变 HIV(1+2型)各片段 的组成比例及包被浓度生产包被板，同时改变酶结 合物稀释液及标本稀释液的配方，保持其他组分不变的情况下，对 HIV(1+2型)酶免检测试剂盒进行反复研 究lIj． 1．2．2 包被浓度试验 根据正交试验和方阵滴定的结果 ，HIV各片段的浓度 ：p24为0．5txg／mL、gpl20 为 1Ixg／mL、gp41为 0．5I~g／mL、gp36为 1I~g／mL．按此 比例将 HIV各片段抗原溶液进行预混合，作为包被 原液．使用时按 (包被缓冲液)：(包被原液)=1：300进行稀释混匀2[1． 1．2-3包被板的生产工艺 0．05moULCB包被缓冲液+HIV(1+2型)包被抗原一l00 L／孔，置4℃、24h一甩 去包被液后用蒸馏水洗板一次，并甩干一加 0．01mol／LPBS+40％FCS的封 闭液200 L／孔 置4℃、24h进 收稿 日期：2009—02—25 基金项 目：河南省重大科技攻关项 目(422031oo0) 作者简介：唐秋艳 (1959一)，女，河南开封人，高级工程师，主要从事体外诊断试剂的研究与生产． — — 682—— 河 南 科 学 第27卷 第6期 行封闭_+甩去封闭液室温风干一密封包装 4℃保存 ． 1．2．4 酶结合物稀释液 0．1％Tween一20、1％BSA和 5％小