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摘 要
TA4基因是柔嫩艾美耳球虫(E
tenella)孢子化卵囊的一个表面抗原基因，其表达的蛋白
具有一定的免疫原性；EtMIC4是编码E
tenella细胞器微线蛋白的基因，在子孢子及裂殖子阶
段表达，分泌的蛋白向后覆盖于虫体的表面，与宿主细胞表面相黏附，参与虫体的运动及入
侵。本文以1A4基因和与球虫入侵宿主细胞有关的EtMIc4部分基因作为研究目标，根据
Genbank中登录的序列设计引物，利用RT-PCR技术从E
tenella(上海株)孢子化卵囊中扩增
得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆：将大小与EtMIC4基因片段预计分子量一
致的片段纯化并经DRI和HindHI双酶切回收后，与经EcoRI和HindⅡI双酶切回收的
(pGEM．TA4)，经核苷酸测序．该序列全长773bp，其中TA4基因的阅读框为651bp，编码
b口、51
为99％(765／770)，即在1M(浙江株)基因序列的38 bp
bo和
229
bp处碱基不同，其翻译后相应的氨基酸也不同，在浙江株是Met和Am，而在上海株则是
和pET-32-a．EtMIC4)，经核苷酸测序，该基因序列全长1351bp，其中基因的阅读框为948bp，
种碱基不同的现象，可能是由于Etenella不同地理株之间存在一定的遗传差异所导致的。将
l和HindIII双酶切并回收后，与经EcoR
经测序为正确的重组克隆质粒(pGEM-TA4)用EcoR
I和Sal I
l和Hind I双酶切并回收后，与经EcoR
III双酶切回收的pET-28-c相连接；用EcoR
和Sal
和pGE)(-4T-2．TA4)。
i；I
Abstract
neTA4 and were
gene EtMIC4 clonedand its
gene sequenced，andprokaryoticexpression
vectorswereconstructedto the information
gain forfurther recombinant
genenal studying vaccine
coccidiosisinthis
against tothe of were
paper，Accordingrepordedsequences，twopairpdmen
and from f
designedsynthesized，two ofE．tenella
genessporozoited strain)were
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