蛋白质组学及其在糖尿病相关疾病中的应用.pdfVIP

中国医药生物技术 2009年6月第4卷第3期 ChinMcdBiotechnol，June2009，Vo1．4，No．3 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673-713X．2009．03．013 · 综 述 · 蛋白质组学及其在糖尿病相关疾病中的 应用 雷培培，丛维涛，金利泰，李校茔 随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学研究已经 酶的消化后通过液相色谱技术将其进行分离5【】，如一维液相 进入了后基因组时代。在这个时代，生命科学的主要研究对 色谱 (one．dimensionalliquidchromatography，1DLC)和二 象是功能基因组学，包括结构基因组研究和蛋白组研究等。 维 液 相 色谱 (two．dimensionalliquid chromatorgaphy， 蛋 白质组学是对基因编码的蛋白质进行大规模分析的一门 2DLC)，前者通常与一维凝胶电泳技术连接 6【】。多维色谱方 新兴学科，是 目前研究的热点。其对于寻找疾病的诊断标志 法可以用于更复杂的肽段混合物的分离如多维蛋白质鉴定 物、筛选药物作用靶点及进行毒理学研究等具有重要的实际 技术 (multi．dimensionalprotein identificationtechnology， 意义，因此成为医药研究的一个新方向。目前作为一种新的 MudPIT) 【。此外还有亲和层析 (Affinitychromatography， 研究手段 ，蛋 白质组学技术 已用于研 究 1型糖尿病 AC)和反相高效液相色谱法 (reversephase-highperformance (T1DM)、2型糖尿病 (T2DM)、胰岛素抵抗的发病机制 liquidchromatography，RP-HPLC)也可用于蛋 白样品的分 以及抗糖尿病药物的开发。 离，然后通过 MS／MS进行蛋白鉴定。这些在蛋白分离前 进行消化的蛋白质组学方法称为 “鸟枪蛋白质组学”。 1 蛋白质组学研究方法 蛋白质组学是一项依赖于技术的领域，需要高性能的分 析仪器来分离构成蛋白质组的大量蛋白质。蛋白质组学技术 可以简单地分为 2大类：分离技术和鉴定技术，分离技术 有双向电泳技术、细胞分级分离技术和亲和层析技术，而鉴 定技术的核心是质谱技术。 1．1 蛋白样品的制备 在蛋白质组学研究中，不可避免的会遇到很多复杂的蛋 白质混合物，因此样品制备是获得高分辨率蛋白最为关键的 一 步。在蛋白质样品制备中，可根据其物理特性，如分子大 小和疏水性或在细胞 内的位置进行分离等 J【j，对于某些特殊 蛋白的破碎和提取使用到一些新的方法包括序贯蛋白提取 法、免疫共沉淀、激光捕获微解剖技术和荧光激活细胞分选 法等2[-4]。 1．2 蛋白质的分离 1．2．1 凝胶分离技术 双向电泳技术是基于凝胶根据各个 蛋白质等电点和分子量的不同将其分离及分布在二维图谱 图 1 蛋白质分离技术 上。第 1向是等电聚焦 (IsoelectricFocusing，IEF)，根据 蛋白质不同的等 电点将其分离 (IsoelectricPoint，pI)。第 2 1．3 蛋 白的鉴定 向是变性剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱技术 (MS)是 目前最重要的蛋白质组学鉴定技术， (SDS．PAGE)。双向电泳技术可以在凝胶上高分辨率地分 因为这种技术具有灵敏度高、只需要很少量的蛋白样品并且 离出数以干计的蛋白质，经过分离后可以用不同的染色技术 具有高通量的优点。生物质谱有多种分析方法，以基质辅助 使分离得到的蛋白可见。 激光解析电离 (MALDI)／飞行时间质谱测量法 (T0F)和 双向电泳的缺点在于一些碱性蛋白质和相对分子质量 较大的蛋白质不能被等电聚焦，由于染色方法的灵敏度不 基金项 目：温州市 留学回国人员创业园补助项 目 (WL；广