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TI MP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质
金属蛋白酶2及其抑制剂的表达
中文摘要
目的本研究通过构建携带基质金属蛋白酶2特异性组织抑制剂(tissue
inhibitorofmatrix
染豚鼠巩膜成纤维细胞，观察其基质金属蛋白酶2(matrix
MMP一2)及TIMP一2的表达，以探讨形觉剥夺性近视基因治疗的可行性，为寻找有效
的预防和控制近视发展的方法提供依据。
方法随机选取三色健康豚鼠，雌雄兼有，组织块方法体外培养原代巩膜成纤维
细胞，免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定，取3-6代细胞进行实验。分子克隆
构建携带TIMP-2基因的真核表达载体，脂质体转染豚鼠巩膜成纤维细胞12h、24h、
48h、3d、5d、7d。采用MTT方法观察转染后细胞增殖能力，提取总RNA，二步
法逆转录一聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。
结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好，波形蛋白鉴定阳性。转染
组与对照组比较转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用。转染48h
MMP一2
mRNA表达即开始减少，转染3d时表达明显减少达到高峰，转染5d一7d虽
mRNA表达
然减少但幅度较前降低，除转染12h与24h之间外，各转染组间MMP一2
差别有统计学意义(P0．05)。转染48h时TIMP一2mRNA表达即开始增加，转染
3d时表达明显增加，转染5d-7d时表达继续增加，但增加的速率较前面降低，除
mRNA表达差别有统计学意义(P
转染12h与转染24h之间外，各转染组间TIMP一2
0．05)。
结论删P一2／TIMP一2mRNA表达平衡的失调在近视发生的早期起着重要的作用，
TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞能够抑制删P-2mRNA的表达，有可能会在
一定程度上阻止近视发展中巩膜的组织丢失与重塑。
硕士研究生牟丽丽(眼科学)
指导老师 刘桂香教授
关键词：转染；豚鼠巩膜成纤维细胞；基质金属蛋白酶2；基质金属蛋白酶2特
异性组织抑制剂
The ofmatrix
expressionmetalloproteinase-2
anditstissueinhibitorinth of withthe
esclerafibroblastcellguineapig
transfectionofTIMP-2
gene
Abstract
Tooberservethe ofmatrix its
Objective expressionmetalloproteinase2(MMP·2)and
tissue inthesclerafibroblastcellof withthe
inhibitor(TIMP-2)mRNA guineapig
transfectionofTIMP一2 the vector．To
genethroughbuildingeukaryoticexpression
the of inthe and the
investigatefeasibilitygene myopia
therapyform—depri
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