盐生杜氏藻培养条件优化、株系筛选和不同株系rDNA+ITS、rbcL序列差异分析.pdfVIP

盐生杜氏藻培养条件优化、株系筛选和不同株系的 rDNA ITS、rbcL序列差异分析 摘要 本论文中我们通过单细胞分离和紫外诱变两种方法来筛选具有优良性状的 盐生杜氏藻(Dunalie]]asa]ina)株系，以期能获得生长速率快、§一胡萝卜素 含量高、具备工业化养殖潜力的株系。而且通过室内和室外实验优化了包括光照、 温度和培养基在内的盐生杜氏藻培养条件，为实现工业化养殖的在线调控提供了 实验和理论基础。另外，克隆得到4株筛选株系(n Israel)、 和0UC66)、2株养殖用株系(口saliaaInner-mongolia和及sa]／na hdlO)在内的8株杜氏 普林莫杜氏藻(口primolecta)和一株未定种(口spo 藻株系的核糖体转录间隔区序列(rDNAITS)和核酮糖一l，5-二磷酸羧化酶／氧化 酶大亚基基因(rbeL)部分序列，基于这两段序列对8株杜氏藻株系进行了分子 系统学和基因型差异分析．， 单细胞分离法筛选得到2株盐生杜氏藻株系(BJ8和BJ38)，通过2次正交 实验研究了光照，温度和营养盐对盐生杜氏藻生长和B一胡萝l、素积累的影响， 旨在探明适于盐生杜氏藻生长和8一胡萝卜素积累的光照、温度和营养盐条件， BJ)的生长和B一胡萝卜素积累速 并对实验中2株筛选株系与出发株(历sa]／na 率进行了初步的比较．结果表明，盐生杜氏藻生长的最适光照和温度分别是 mol几时 NaHCO，18==ol／L，而当NAN03、尿素、NaIlc仉浓度分别为O、0．2、18 有利于B一胡萝卜素的积累．高光照、低温有利于杜氏藻细胞B一胡萝卜素的积累。 在218．2 胡萝卜素的能力高于另外两株，但差异不显著。 以单细胞分离筛选得到的盐生杜氏藻株系BJ38为出发株，利用紫外诱变筛 变株对光照和温度的反应。结果显示，光照实验中诱变株和出发株(Bj38)生长与 m-2 量一胡萝卜素积累的最适光照强度相同，都是214．08tunol s．1，此光强下诱 变株的生长速率要高于出发株，其中0UC36生长速率最快，藻细胞密度 OUC21(6．6jSmg／L)则低于出发株，各光强下3株诱变株单位体积藻液叶绿素的积 累量都高于出发株．诱变株与出发株在最适生长温度上表现出差异性，出发株生 温度是28C，实验中同一温度条件下诱变株的生长速率高于出发株，最大的也 是0UC36；适于6一胡萝卜素积累的温度，诱变株与出发株相同，都是22℃，3 株诱变株中同样是0UC36单位体积藻液B一胡萝卜素积累量(7．9mg／L)最大，略高 绿素含量高于出发株。0UC36具有生长速率快和积累13一胡萝卜素能力强的优点， 可能成为适用于大规模养殖的藻种。 在无棣，将诱变株0UC36进行室外养殖以验证其养殖潜力。采用基于兰太卤 1010cells，14 水优化的培养基，使用埕口卤水培养，初始接种生物量为4．959X 天后生物量达到4．628×10”celIs，增长率高达8．33，细胞平均生长速率为16．096 d．1，显示了室外养殖0UC36仍具有较高的生长速率，也初步说明优化的培养基适 用于埕口卤水。 在内蒙古兰太生物工程公司养殖基地工作期间，主要通过室外l叠PVC扩种 池探讨了工业化养殖中的N源及添加量，并通过正交实验优化了养殖用培养基。 结果表明：室外养殖时0．2mmol／L的NH斟03即对细胞造成伤害：营养盐正交实 和NaHC03-12mmoFL。 对8株杜氏藻株系的rDNAITS序列和rbcL基因序列分析结果显示：在种间 水平上，rDNAITS序列存在更多的多态性位点(polymorphicsites，52)和信 informative 息位点(parsi